中文
تأثير تباين درجة الحرارة على ثقافة الخلية
درجة الحرارة هي معلمة مهمة في ثقافة الخلية لأنها تؤثر على استنساخ النتائج. تتغير درجة الحرارة أعلى أو أقل من 37 درجة مئوية تأثير كبير للغاية على حركية نمو الخلايا لخلايا الثدييات ، على غرار الخلايا البكتيرية. التغيرات في التعبير الجيني والتعديلات في التركيب الخلوي ، وتطور دورة الخلية ، يمكن اكتشاف استقرار مرنا في خلايا الثدييات بعد ساعة واحدة عند 32 درجة مئوية. بالإضافة إلى التأثير بشكل مباشر على نمو الخلايا ، تؤثر التغيرات في درجة الحرارة أيضًا على درجة الحموضة في الوسائط ، حيث أن قابلية ذوبان ثاني أكسيد الكربون يغير الرقم الهيدروجيني (زيادة درجة الحموضة في درجات الحرارة المنخفضة). يمكن أن تتسامح خلايا الثدييات المثقفة في درجة حرارة كبيرة. يمكن تخزينها في 4 درجات مئوية لعدة أيام ويمكن أن تتسامح مع التجمد إلى -196 درجة مئوية (باستخدام الظروف المناسبة). ومع ذلك ، لا يمكنهم تحمل درجات الحرارة فوق حوالي 2 درجة مئوية أعلى من المعتاد لأكثر من بضع ساعات وسيموت بسرعة عند 40 درجة مئوية وما فوق. لضمان أقصى قدر من التكاثر للنتائج ، حتى لو نجا الخلايا ، يجب توخي الحذر للحفاظ على درجة الحرارة ثابتة قدر الإمكان أثناء حضانة الخلايا والتعامل معها خارج الحاضنة.
أسباب اختلافات درجة الحرارة داخل الحاضنة
ستلاحظ أنه عند فتح باب الحاضنة ، تنخفض درجة الحرارة بسرعة إلى القيمة المحددة البالغة 37 درجة مئوية. بشكل عام ، ستتعافى درجة الحرارة في غضون بضع دقائق بعد إغلاق الباب. في الواقع ، تحتاج الثقافات الثابتة إلى وقت للتعافي إلى درجة حرارة المحددة في الحاضنة. يمكن أن يؤثر عدد من العوامل على الوقت الذي يستغرقه ثقافة الخلية لاستعادة درجة الحرارة بعد العلاج خارج الحاضنة.وتشمل هذه العوامل ：
- ▶ طول الوقت الذي كانت فيه الخلايا خارج الحاضنة
- ▶ نوع القارورة التي تزرع فيها الخلايا (تؤثر الهندسة على نقل الحرارة)
- ▶ عدد الحاويات في الحاضنة.
- ▶ التلامس المباشر للقوارير مع رف الصلب يؤثر على تبادل الحرارة وسرعة الوصول إلى درجة الحرارة المثلى ، لذلك من الأفضل تجنب أكوام القوارير ووضع كل سفينة
- ▶ مباشرة على رف الحاضنة.
ستؤثر درجة الحرارة الأولية لأي حاويات ووسائط طازجة المستخدمة أيضًا على الوقت الذي تستغرقه الخلايا لتكون في حالتها المثلى ؛ كلما انخفضت درجة حرارتها ، كلما استغرق الأمر.
إذا تغيرت كل هذه العوامل مع مرور الوقت ، فستزيد أيضًا من التباين بين التجارب. من الضروري تقليل تقلبات درجة الحرارة هذه ، حتى لو لم يكن من الممكن دائمًا التحكم في كل شيء (خاصة إذا كان العديد من الأشخاص يستخدمون نفس الحاضنة).
كيفية تقليل اختلافات درجة الحرارة وتقليل وقت استرداد درجة الحرارة
عن طريق تسخين الوسيلة
يعتاد بعض الباحثين على تزوير زجاجات كاملة من الوسائط في حمام مائي 37 درجة مئوية لإحضارهم إلى درجة الحرارة هذه قبل الاستخدام. من الممكن أيضًا تسخين الوسيلة في حاضنة تستخدم فقط للتسخين المتوسط وليس لثقافة الخلية ، حيث يمكن للوسيط الوصول إلى درجة حرارة مثالية دون إزعاج ثقافات الخلية في حاضنة أخرى. لكن هذا ، على حد علمنا ، ليس عادةً نفقات بأسعار معقولة.
داخل الحاضنة
افتح باب الحاضنة بأقل قدر ممكن وأغلقه بأسرع ما. تجنب البقع الباردة ، والتي تخلق اختلافات في درجة الحرارة في الحاضنة. اترك المساحة بين القوارير للسماح للهواء بالتعميم. يمكن أن تكون الأرفف داخل الحاضنة مثقبة. هذا يسمح بتوزيع حرارة أفضل لأنه يسمح للهواء بالمرور عبر الثقوب. ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي وجود الثقوب إلى اختلافات في نمو الخلايا ، لأن هناك اختلاف في درجة الحرارة بين المنطقة ذات الثقوب والمنطقة مع التعريف. لهذه الأسباب ، إذا كانت تجاربك تتطلب نموًا موحدًا للغاية لثقافة الخلية ، فيمكنك وضع قوارير الثقافة على الدعم المعدني مع أسطح ملامسة أصغر ، والتي عادة ما تكون ضرورية في ثقافة الخلايا الروتينية.
تقليل وقت معالجة الخلايا
لتقليل الوقت الذي يقضيه في عملية معالجة الخلايا ، تحتاج إلى ذلك
- ▶ تنظيم جميع المواد والأدوات اللازمة قبل البدء في العمل.
- ▶ اعمل بسرعة وسلاسة ، ومراجعة الطرق التجريبية مقدمًا بحيث تصبح عملياتك متكررة وآلية.
- ▶ قلل من ملامسة السوائل مع الهواء المحيط.
- ▶ الحفاظ على درجة حرارة ثابتة في مختبر ثقافة الخلية حيث تعمل.
وقت النشر: أغسطس -18-2023