中文
Уплыў змены тэмпературы на клеткавую культуру
Тэмпература з'яўляецца важным параметрам у клеткавай культуры, паколькі яна ўплывае на ўзнаўляльнасць вынікаў. Змены тэмпературы вышэй або ніжэй за 37 ° С аказваюць вельмі значны ўплыў на кінетыку росту клетак клетак млекакормячых, падобную на бактэрыяльныя клеткі. Changes in gene expression and modifications in cellular structure, cell cycle progression, mRNA stability can be detected in mammalian cells after one hour at 32ºC. In addition to directly affecting cell growth, changes in temperature also affect the pH of the media, as the solubility of CO2 alters the pH (pH increases at lower temperatures). Культурныя клеткі млекакормячых могуць пераносіць значнае зніжэнне тэмпературы. Яны могуць захоўвацца пры 4 ° С на працягу некалькіх дзён і могуць пераносіць замярзанне да -196 ° С (з выкарыстаннем адпаведных умоў). Аднак яны не могуць пераносіць тэмпературу вышэй за 2 ° С вышэй за норму больш за некалькі гадзін і хутка загінуць пры 40 ° С і вышэй. To ensure maximum reproducibility of results, even if the cells survive, care needs to be taken to maintain the temperature as constant as possible during the incubation and handling of the cells outside the incubator.
Прычыны ваганняў тэмпературы ўнутры інкубатара
Вы заўважылі, што пры адчыненай дзверы інкубатара тэмпература хутка падае да ўстаноўленага значэння 37 ° С. Увогуле, тэмпература аднаўляецца на працягу некалькіх хвілін пасля закрыцця дзвярэй. На самай справе, статычным культурам патрэбны час, каб аднавіцца да ўстаноўленай тэмпературы ў інкубатары. Шэраг фактараў можа паўплываць на час, неабходнае для клеткавай культуры, каб аднавіць тэмпературу пасля лячэння за межамі інкубатара.Гэтыя фактары ўключаюць:
- ▶ Прамежак часу, калі клеткі былі з -за інкубатара
- ▶ Тып колбы, у якой вырошчваюцца клеткі (геаметрыя ўплывае на перадачу цяпла)
- ▶ Колькасць кантэйнераў у інкубатары.
- ▶ непасрэдна на паліцы інкубатара.
Першапачатковая тэмпература любых свежых кантэйнераў і выкарыстаных асяроддзяў таксама паўплывае на час, каб клеткі былі ў іх аптымальным стане; Чым ніжэй іх тэмпература, тым даўжэй займае.
Калі ўсе гэтыя фактары мяняюцца з цягам часу, яны таксама павялічаць зменлівасць паміж эксперыментамі. It is necessary to minimize these temperature fluctuations, even if it is not always possible to control everything (especially if several people are using the same incubator).
Як мінімізаваць змены тэмператур і скараціць час аднаўлення тэмпературы
Папярэдне разагрэў асяроддзе
Некаторыя даследчыкі прывыклі да папярэдняга сагравання цэлых бутэлек з асяроддзя на вадзяной лазні на 37 ° С, каб давесці іх да гэтай тэмпературы перад выкарыстаннем. It is also possible to preheat the medium in an incubator that is only used for medium preheating and not for cell culture, where the medium can reach an optimal temperature without disturbing the cell cultures in another incubator. Але, наколькі мы ведаем, гэта звычайна не з'яўляецца даступным выдаткам.
Унутры інкубатара
Адкрыйце дзверы інкубатара як мага хутчэй і зачыніце яе як хутка. Пазбягайце халодных плям, якія ствараюць тэмпературныя адрозненні ў інкубатары. Пакіньце прастору паміж колбамі, каб дазволіць паветра цыркуляваць. Паліцы ўнутры інкубатара могуць быць перфараваны. Гэта дазваляе лепшае размеркаванне цяпла, бо дазваляе паветра праходзіць праз адтуліны. However, the presence of holes can lead to differences in cell growth, because there is a temperature difference between the area with holes and the area with meta. For these reasons, if your experiments require highly uniform growth of the cell culture, you can place the culture flasks on metal supports with smaller contact surfaces, which are usually not necessary in routine cell culture.
Мінімізацыя часу апрацоўкі клетак
Каб звесці да мінімуму час выдаткаў на працэс лячэння клетак, вам трэба
- ▶ Арганізуйце ўсе неабходныя матэрыялы і інструменты, перш чым пачаць працаваць.
- ▶ Працуйце хутка і гладка, загадзя разглядаючы эксперыментальныя метады, каб вашы аперацыі паўтараліся і аўтаматызаваліся.
- ▶ Звядзіце да мінімуму кантакт вадкасцяў з навакольным паветрам.
- ▶ Падтрымлівайце пастаянную тэмпературу ў лабараторыі клеткавай культуры, дзе вы працуеце.
Час паведамлення: жніўня-18-2023