中文
Efekat varijacije temperature na staničnu kulturu
Temperatura je važan parametar u ćelijskoj kulturi jer utječe na obnovljivost rezultata. Izmjene temperature iznad ili ispod 37 ° C imaju vrlo značajan utjecaj na kinetiku rasta ćelije sisarnih ćelija, slično onoj bakterijskih ćelija. Promjene u izražavanju gena i modifikacije u staničnoj strukturi, napredovanju ćelijskog ciklusa, stabilnost MRNA može se otkriti u ćelijama sisara nakon jednog sata na 32 ° C. Osim što je direktno utjecao na rast ćelija, promjene temperature također utječu na pH medija, jer rastvorljivost CO2 mijenja pH (pH povećava niže temperature). Kulturirane ćelije sisara mogu podnijeti značajnu temperaturu smanjenja. Mogu se pohraniti na 4 ° C nekoliko dana i mogu tolerirati zamrzavanje na -196 ° C (koristeći odgovarajuće uvjete). Međutim, ne mogu tolerirati temperature iznad oko 2 ° C iznad normalnog više od nekoliko sati i brzo će umrijeti na 40 ° C i više. Da bi se osigurala maksimalna reproduktivnost rezultata, čak i ako ćelije preživjeti, treba poduzeti briga za održavanje temperature kao konstantne tokom inkubacije i rukovanja ćelijama izvan inkubatora.
Razlozi temperaturnih varijacija unutar inkubatora
Primijetili ćete da se kada se otvori vrata inkubatora, temperatura se brzo spušta na postavljenu vrijednost od 37 ° C. Općenito, temperatura će se oporaviti u roku od nekoliko minuta nakon što su vrata zatvorena. Zapravo, statičke kulture treba vremena za oporavak do postavljene temperature u inkubatoru. Brojni faktori mogu utjecati na vrijeme koje je potrebno za staničnu kulturu da povrati temperaturu nakon tretmana izvan inkubatora.Ovi faktori uključuju:
- ▶ Dužina vremena ćelije su izvan inkubatora
- ▶ Vrsta tikvice u kojoj se stanice uzgajaju (geometrija utiče na transfer topline)
- ▶ Broj kontejnera u inkubatoru.
- ▶ Direktan kontakt tikvica sa čeličnom policom utječe na razmjenu topline i brzinu dostizanja optimalne temperature, tako da je bolje izbjeći hrpe boju i da biste postavili svaku posudu
- ▶ direktno na polica inkubatora.
Početna temperatura bilo kojeg svježih kontejnera i rabljenih medija također će utjecati na vrijeme koje je potrebno da ćelije biti u optimalnom stanju; niža temperatura, duže je potrebno.
Ako se svi ti faktori tokom vremena mijenjaju, oni će povećati varijabilnost između eksperimenata. Potrebno je smanjiti ove temperaturne fluktuacije, čak i ako nije uvijek moguće kontrolirati sve (posebno ako nekoliko ljudi koristi isti inkubator).
Kako minimizirati temperaturne varijacije i smanjiti vrijeme oporavka temperature
Predgrijavanjem srednjeg
Neki istraživači su navikli da se prevladaju cijele boce medija u vodenoj kupki od 37 ° C kako bi ih prebacili na tu temperaturu prije upotrebe. Također je moguće pregrijavati medij u inkubatoru koji se koristi samo za srednje predgrijavanje, a ne za staničnu kulturu, gdje medij može dostići optimalnu temperaturu bez narušavanja staničnih kultura u drugom inkubatoru. Ali, koliko znamo, obično nije pristupačan trošak.
Unutar inkubatora
Otvorite vrata inkubatora što je manje moguće i zatvorite je tako brzo. Izbjegavajte hladne mrlje, koje stvaraju temperaturne razlike u inkubatoru. Ostavite prostor između tikvica kako bi se omogućilo da se zrak kruži. Police unutar inkubatora mogu se perforirati. To omogućava bolju distribuciju topline jer omogućava da se zrak prolazi kroz rupe. Međutim, prisustvo rupa može dovesti do razlike u rastu ćelija, jer postoji temperaturna razlika između područja sa rupama i područjem s meta. Iz tih razloga, ako vaši eksperimenti zahtijevaju visoko jedinstveni rast ćelije, možete postaviti kulturne tikvice na metalne nosače s manjim kontaktnim površinama, koje obično nisu potrebne u rutinskoj kulturi.
Minimiziranje vremena obrade ćelija
Da biste umanjili vrijeme provođenja u procesu liječenja ćelije, morate
- ▶ Organizirajte sve potrebne materijale i alate prije nego što počnete s radom.
- ▶ Radite brzo i glatko, preispitajte eksperimentalne metode unaprijed tako da vaše operacije postanu ponavljaju i automatizirani.
- ▶ Minimizirajte kontakt tečnosti sa ambijentalnim zrakom.
- ▶ Održavajte stalnu temperaturu u laboratoriji za kulturu Cell Culture gdje radite.
Pošta: Aug-18-2023