中文
Efecte de la variació de la temperatura sobre el cultiu cel·lular
La temperatura és un paràmetre important en el cultiu cel·lular perquè afecta la reproductibilitat dels resultats. Els canvis de temperatura per sobre o per sota dels 37 ° C tenen un efecte molt significatiu sobre la cinètica de creixement cel·lular de les cèl·lules de mamífers, similar a la de les cèl·lules bacterianes. Canvis en l'expressió gènica i les modificacions en l'estructura cel·lular, la progressió del cicle cel·lular, l'estabilitat de l'ARNm es pot detectar a les cèl·lules de mamífers després d'una hora a 32ºC. A més d’afectar directament el creixement cel·lular, els canvis de temperatura també afecten el pH del medi, ja que la solubilitat del CO2 altera el pH (pH augmenta a temperatures més baixes). Les cèl·lules de mamífers cultivades poden tolerar una disminució significativa de la temperatura. Es poden emmagatzemar a 4 ° C durant diversos dies i poden tolerar la congelació a -196 ° C (mitjançant condicions adequades). No obstant això, no poden tolerar les temperatures per sobre de 2 ° C per sobre de la normalitat durant més d'unes hores i moriran ràpidament a 40 ° C i per sobre. Per assegurar la màxima reproductibilitat dels resultats, fins i tot si les cèl·lules sobreviuen, cal tenir cura per mantenir la temperatura el més constant possible durant la incubació i la manipulació de les cèl·lules fora de la incubadora.
Raons per a les variacions de temperatura dins de la incubadora
Haureu notat que quan s’obre la porta de la incubadora, la temperatura baixa ràpidament fins al valor establert de 37 ° C. En general, la temperatura es recuperarà en pocs minuts després que la porta es tanqui. De fet, els cultius estàtics necessiten temps per recuperar -se a la temperatura establerta a la incubadora. Alguns factors poden afectar el temps que triga a que un cultiu cel·lular recuperi la temperatura després del tractament fora de la incubadora. Aquests factors inclouen ：
- ▶ El temps que les cèl·lules han estat fora de la incubadora
- ▶ El tipus de matràs en què es cultiven les cèl·lules (la geometria afecta la transferència de calor)
- ▶ Nombre de contenidors a la incubadora.
- ▶ El contacte directe dels matràs amb la prestatgeria d’acer afecta l’intercanvi de calor i la velocitat d’arribar a la temperatura òptima, de manera que és millor evitar piles de matràs i col·locar cada vaixell
- ▶ directament a la prestatgeria de la incubadora.
La temperatura inicial de contenidors i medis frescos utilitzats també afectarà el temps que triga a que les cèl·lules estiguin en estat òptim; Com més baixa la seva temperatura, més temps triga.
Si tots aquests factors canvien amb el pas del temps, també augmentaran la variabilitat entre experiments. Cal minimitzar aquestes fluctuacions de temperatura, fins i tot si no sempre és possible controlar -ho tot (sobretot si diverses persones utilitzen la mateixa incubadora).
Com minimitzar les variacions de temperatura i reduir el temps de recuperació de la temperatura
Preescalfant el mitjà
Alguns investigadors estan acostumats a les ampolles senceres de suports pre-escalfadors en un bany d’aigua de 37 ° C per portar-los a aquesta temperatura abans de l’ús. També és possible escalfar el medi en una incubadora que només s’utilitza per al preescalfament mitjà i no per al cultiu cel·lular, on el medi pot arribar a una temperatura òptima sense molestar els cultius cel·lulars en una altra incubadora. Però això, pel que sabem, no sol ser una despesa assequible.
Dins de la incubadora
Obriu la porta de la incubadora el mínim possible i tanqueu -la tan ràpidament. Eviteu les taques fredes, que creen diferències de temperatura en la incubadora. Deixeu l’espai entre els matràs per permetre que l’aire circuli. Els prestatges de la incubadora es poden perforar. Això permet una millor distribució de calor, ja que permet que l’aire passi pels forats. Tot i això, la presència de forats pot comportar diferències en el creixement de les cèl·lules, perquè hi ha una diferència de temperatura entre la zona amb els forats i la zona amb meta. Per aquestes raons, si els vostres experiments requereixen un creixement molt uniforme del cultiu cel·lular, podeu col·locar els matràs de cultiu en suports metàl·lics amb superfícies de contacte més petites, que normalment no són necessàries en el cultiu de les cèl·lules rutinàries.
Minimitzar el temps de processament de cèl·lules
Per minimitzar el temps de despesa en el procés de tractament cel·lular, cal que
- ▶ Organitzeu tots els materials i eines necessaris abans de començar a funcionar.
- ▶ Treballar ràpidament i sense problemes, revisant els mètodes experimentals amb antelació de manera que les vostres operacions es tornin repetitives i automatitzades.
- ▶ Minimitzar el contacte de líquids amb aire ambient.
- ▶ Mantingueu una temperatura constant al laboratori de cultiu cel·lular on treballeu.
Post Horari: 03 de gener de 2014