中文
Vliv změny teploty na buněčnou kulturu
Teplota je důležitým parametrem v buněčné kultuře, protože ovlivňuje reprodukovatelnost výsledků. Změny teploty nad nebo pod 37 ° C mají velmi významný účinek na kinetiku buněk buněk savčích buněk, podobně jako u bakteriálních buněk. Změny exprese a modifikací genu v buněčné struktuře, progresi buněčného cyklu, stability mRNA mohou být detekovány v savčích buňkách po jedné hodině při 32 ° C. Kromě přímého ovlivňování růstu buněk ovlivňují změny teploty také pH média, protože rozpustnost CO2 mění pH (pH se zvyšuje při nižších teplotách). Kultivované savčí buňky mohou tolerovat významné snížení teploty. Mohou být skladovány při 4 ° C po dobu několika dnů a mohou tolerovat zmrazení na -196 ° C (za použití vhodných podmínek). Nemohou však tolerovat teploty nad 2 ° C nad normální po dobu delší než několik hodin a rychle zemřou při 40 ° C a vyšší. Aby se zajistila maximální reprodukovatelnost výsledků, i když buňky přežívají, je třeba věnovat pozornost udržení teploty co nejvíce během inkubace a manipulace s buňkami mimo inkubátor.
Důvody pro změny teploty uvnitř inkubátoru
Všimli jste si, že když se otevřou dveře inkubátoru, teplota rychle klesne na nastavenou hodnotu 37 ° C. Obecně se teplota zotaví během několika minut poté, co jsou dveře zavřeny. Statické kultury ve skutečnosti potřebují čas na zotavení na nastavenou teplotu v inkubátoru. Doba potřebné pro buněčnou kulturu může ovlivnit řada faktorů, aby se obnovila teplota po ošetření mimo inkubátor. Mezi tyto faktory patří ：
- ▶ Délka doby, po kterou byly buňky mimo inkubátor
- ▶ Typ baňky, ve které se buňky pěstují (geometrie ovlivňuje přenos tepla)
- ▶ Počet kontejnerů v inkubátoru.
- ▶ Přímý kontakt s baňkami s ocelovou policí ovlivňuje výměnu tepla a rychlost dosažení optimální teploty, takže je lepší vyhnout se hromádkám baňků a umístit každé lodi
- ▶ přímo na polici inkubátoru.
Počáteční teplota jakýchkoli použitých čerstvých kontejnerů a médií také ovlivní čas potřebného k tomu, aby buňky byly v jejich optimálním stavu; Čím nižší je jejich teplota, tím déle to trvá.
Pokud se všechny tyto faktory v průběhu času změní, zvýší také variabilitu mezi experimenty. Je nutné tyto fluktuace teploty minimalizovat, i když není vždy možné ovládat vše (zejména pokud několik lidí používá stejný inkubátor).
Jak minimalizovat změny teploty a zkrátit dobu zotavení teploty
Předehříváním média
Někteří vědci jsou zvyklí na předběžné oteplování celých lahví médií ve vodní lázni 37 ° C, aby je před použitím přivedli na tuto teplotu. Je také možné předehřet médium v inkubátoru, který se používá pouze pro předehřívání středního a ne pro buněčnou kulturu, kde médium může dosáhnout optimální teploty bez narušení buněčných kultur v jiném inkubátoru. Ale to, pokud víme, obvykle není cenově dostupný výdaj.
Uvnitř inkubátoru
Otevřete dveře inkubátoru co nejméně a zavřete je tak rychle. Vyvarujte se studených skvrn, které vytvářejí teplotní rozdíly v inkubátoru. Nechte prostor mezi baňkami, aby umožnil cirkulaci vzduchu. Poliky uvnitř inkubátoru mohou být perforovány. To umožňuje lepší rozdělení tepla, protože umožňuje vzduchu procházet otvory. Přítomnost děr však může vést k rozdílům v růstu buněk, protože mezi oblastí s otvory a oblastí s meta existuje teplotní rozdíl. Z těchto důvodů, pokud vaše experimenty vyžadují vysoce jednotný růst buněčné kultury, můžete umístit kulturní baňky na kovové podpěry s menšími kontaktními povrchy, které obvykle nejsou v rutinní buněčné kultuře nutné.
Minimalizace doby zpracování buněk
Chcete -li minimalizovat čas strávení času v procesu léčby buněk, musíte
- ▶ Před začnete pracovat všechny potřebné materiály a nástroje.
- ▶ Pracujte rychle a hladce a přečtěte experimentální metody předem, aby se vaše operace opakovaly a automatizovaly.
- ▶ Minimalizujte kontakt kapalin s okolním vzduchem.
- ▶ Udržujte konstantní teplotu v laboratoři buněčné kultury, kde pracujete.
Čas příspěvku: leden-03-2024