中文
Effekt af temperaturvariation på cellekultur
Temperatur er en vigtig parameter i cellekultur, fordi den påvirker reproducerbarheden af resultaterne. Temperaturændringer over eller under 37 ° C har en meget signifikant effekt på cellevækstkinetikken for pattedyrceller, svarende til bakteriecellers. Ændringer i genekspression og modifikationer i cellulær struktur, cellecyklusprogression, mRNA -stabilitet kan påvises i pattedyrceller efter en time ved 32 ° C. Ud over direkte påvirkning af cellevækst påvirker ændringer i temperatur også pH i medierne, da opløseligheden af CO2 ændrer pH (pH øges ved lavere temperaturer). Dyrkede pattedyrceller kan tolerere betydelige temperaturfald. De kan opbevares ved 4 ° C i flere dage og kan tolerere frysning til -196 ° C (ved hjælp af passende betingelser). De kan dog ikke tolerere temperaturer over ca. 2 ° C over det normale i mere end et par timer og vil dø hurtigt ved 40 ° C og derover. For at sikre maksimal reproducerbarhed af resultater, selvom cellerne overlever, skal der udvises omhu for at opretholde temperaturen så konstant som muligt under inkubationen og håndteringen af cellerne uden for inkubatoren.
Årsager til temperaturvariationer inde i inkubatoren
Du vil have lagt mærke til, at når inkubatordøren åbnes, falder temperaturen hurtigt til den indstillede værdi på 37 ° C. Generelt vil temperaturen komme sig inden for få minutter efter, at døren er lukket. Faktisk har statiske kulturer brug for tid til at komme sig til den indstillede temperatur i inkubatoren. En række faktorer kan påvirke den tid, det tager for en cellekultur at genvinde temperaturen efter behandling uden for inkubatoren. Disse faktorer inkluderer ：
- ▶ Længden af tiden har cellerne været ude af inkubatoren
- ▶ Den type kolbe, hvor cellerne dyrkes (geometri påvirker varmeoverførsel)
- ▶ Antal containere i inkubatoren.
- ▶ Diren
- ▶ Direkte på inkubatorens hylde.
Den oprindelige temperatur for eventuelle friske containere og medier, der er anvendt, vil også påvirke den tid, det tager for cellerne at være i deres optimale tilstand; Jo lavere deres temperatur, jo længere tager det.
Hvis alle disse faktorer ændrer sig over tid, vil de også øge variationen mellem eksperimenter. Det er nødvendigt at minimere disse temperatursvingninger, selvom det ikke altid er muligt at kontrollere alt (især hvis flere mennesker bruger den samme inkubator).
Hvordan man minimerer temperaturvariationer og reducerer temperaturgenvindingstiden
Ved at forvarme mediet
Nogle forskere er vant til at opvarme hele flasker medier i et 37 ° C vandbad for at bringe dem til denne temperatur inden brug. Det er også muligt at forvarme mediet i en inkubator, der kun bruges til medium forvarmning og ikke til cellekultur, hvor mediet kan nå en optimal temperatur uden at forstyrre cellekulturerne i en anden inkubator. Men dette, så vidt vi ved, er normalt ikke en overkommelig udgift.
Inde i inkubatoren
Åbn inkubatordøren så lidt som muligt, og luk den så hurtigt. Undgå kolde pletter, der skaber temperaturforskelle i inkubatoren. Efterlad plads mellem kolberne for at lade luft cirkulere. Hylderne inde i inkubatoren kan perforeres. Dette giver mulighed for bedre varmefordeling, da det giver luft mulighed for at passere gennem hullerne. Tilstedeværelsen af huller kan imidlertid føre til forskelle i cellevækst, fordi der er en temperaturforskel mellem området med huller og området med meta. Af disse grunde, hvis dine eksperimenter kræver meget ensartet vækst af cellekulturen, kan du placere kulturfolgerne på metalstøtter med mindre kontaktflader, som normalt ikke er nødvendige i rutinemæssig cellekultur.
Minimering af cellebyggetid
For at minimere tidsforbruget i cellebehandlingsprocessen skal du
- ▶ Organiser alle de nødvendige materialer og værktøjer, inden du begynder at arbejde.
- ▶ Arbejd hurtigt og glat, og gennemgå eksperimentelle metoder på forhånd, så dine operationer bliver gentagne og automatiserede.
- ▶ Minimer kontakten af væsker med omgivende luft.
- ▶ Oprethold en konstant temperatur i cellekulturlaboratoriet, hvor du arbejder.
Posttid: Jan-03-2024