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Einfluss der Temperaturvariation auf die Zellkultur
Die Temperatur ist ein wichtiger Parameter in der Zellkultur, da sie die Reproduzierbarkeit von Ergebnissen beeinflusst. Temperaturänderungen über oder unter 37 ° C haben einen sehr signifikanten Einfluss auf die Zellwachstumskinetik von Säugetierzellen, ähnlich der von Bakterienzellen. Änderungen der Genexpression und Modifikationen der Zellstruktur, des Fortschreitens des Zellzyklus und der mRNA -Stabilität können nach einer Stunde bei 32 ° C in Säugetierzellen nachgewiesen werden. Zusätzlich zum direkten Einfluss des Zellwachstums beeinflussen die Temperaturänderungen auch den pH -Wert des Mediens, da die Löslichkeit von CO2 den pH -Wert ändert (pH steigt bei niedrigeren Temperaturen). Kultivierte Säugetierzellen können eine signifikante Temperatur abnehmen. Sie können mehrere Tage lang bei 4 ° C gelagert werden und können das Einfrieren auf -196 ° C (unter Verwendung geeigneter Bedingungen) tolerieren. Sie können jedoch keine Temperaturen über 2 ° C über dem Normalwert länger als ein paar Stunden tolerieren und sterben schnell bei 40 ° C und mehr. Um die maximale Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zu gewährleisten, muss darauf geachtet werden, dass die Zellen während der Inkubation und Handhabung der Zellen außerhalb des Inkubators so konstant wie möglich aufrechterhalten werden.
Gründe für Temperaturschwankungen im Inkubator
Sie werden festgestellt haben, dass die Temperatur beim Öffnen der Inkubatortür schnell auf den eingestellten Wert von 37 ° C sinkt. Im Allgemeinen erholt sich die Temperatur innerhalb weniger Minuten nach dem Schließen der Tür. Tatsächlich benötigen statische Kulturen Zeit, um sich auf die festgelegte Temperatur im Inkubator zu erholen. Eine Reihe von Faktoren kann die Zeit beeinflussen, die eine Zellkultur benötigt, um nach der Behandlung außerhalb des Inkubators die Temperatur wiederzugewinnen. Diese Faktoren sind:
- ▶ Die Zeitdauer, in der die Zellen aus dem Inkubator entfernt waren
- ▶ Die Art des Kolbens, in dem die Zellen angebaut werden (Geometrie beeinflusst die Wärmeübertragung)
- ▶ Anzahl der Behälter im Inkubator.
- ▶ Direkter Kontakt der Flaschen mit dem Stahlregal beeinflusst den Wärmeaustausch und die Geschwindigkeit, um die optimale Temperatur zu erreichen. Daher ist es besser, Stapel von Flaschen zu vermeiden und jedes Schiff zu platzieren
- ▶ Direkt im Regal des Inkubators.
Die anfängliche Temperatur aller verwendeten frischen Behälter und Medien wirkt sich auch auf die Zeit aus, die die Zellen in ihrem optimalen Zustand benötigen. Je niedriger ihre Temperatur ist, desto länger dauert es.
Wenn sich all diese Faktoren im Laufe der Zeit ändern, erhöhen sie auch die Variabilität zwischen den Experimenten. Es ist notwendig, diese Temperaturschwankungen zu minimieren, auch wenn es nicht immer möglich ist, alles zu kontrollieren (insbesondere wenn mehrere Personen denselben Inkubator verwenden).
So minimieren Sie die Temperaturschwankungen und verkürzen Sie die Erholungszeit der Temperatur
Durch Vorheizen des Mediums
Einige Forscher sind es gewohnt, ganze Flaschen Medien in einem Wasserbad von 37 ° C vorzuwärmen, um sie vor der Verwendung auf diese Temperatur zu bringen. Es ist auch möglich, das Medium in einem Inkubator vorzuheizen, der nur für das mittlere Vorheizen und nicht für die Zellkultur verwendet wird, wobei das Medium eine optimale Temperatur erreichen kann, ohne die Zellkulturen in einem anderen Inkubator zu stören. Soweit wir wissen, ist dies jedoch normalerweise keine erschwingliche Kosten.
Im Inkubator
Öffnen Sie die Inkubatortür so wenig wie möglich und schließen Sie sie so schnell. Vermeiden Sie kalte Flecken, die Temperaturunterschiede im Inkubator erzeugen. Lassen Sie den Raum zwischen den Kolben, damit die Luft zirkulieren kann. Die Regale im Inkubator können perforiert werden. Dies ermöglicht eine bessere Wärmeverteilung, da die Luft durch die Löcher verläuft. Das Vorhandensein von Löchern kann jedoch zu Unterschieden im Zellwachstum führen, da ein Temperaturunterschied zwischen der Fläche mit Löchern und der Fläche mit Meta besteht. Wenn Ihre Experimente aus diesen Gründen ein ein einheitliches Wachstum der Zellkultur erfordern, können Sie die Kulturflaschen mit kleineren Kontaktflächen mit kleineren Kontaktflächen platzieren, die in der routinemäßigen Zellkultur normalerweise nicht erforderlich sind.
Minimierung der Zellverarbeitungszeit
Um die Zeitausgaben für den Zellbehandlungsprozess zu minimieren, müssen Sie
- ▶ Organisieren Sie alle erforderlichen Materialien und Werkzeuge, bevor Sie mit der Arbeit beginnen.
- ▶ Arbeiten Sie schnell und reibungslos und überprüfen Sie die experimentellen Methoden im Voraus, damit Ihre Vorgänge sich wiederholt und automatisiert haben.
- ▶ Minimieren Sie den Kontakt von Flüssigkeiten mit Umgebungsluft.
- ▶ Halten Sie eine konstante Temperatur im Zellkulturlabor bei, in der Sie arbeiten.
Postzeit: Januar-03-2024