中文
Επίδραση της μεταβολής της θερμοκρασίας στην κυτταρική καλλιέργεια
Η θερμοκρασία είναι μια σημαντική παράμετρος στην κυτταρική καλλιέργεια επειδή επηρεάζει την αναπαραγωγικότητα των αποτελεσμάτων. Οι μεταβολές της θερμοκρασίας πάνω ή κάτω από 37 ° C έχουν πολύ σημαντική επίδραση στην κινητική κυτταρικής ανάπτυξης των κυττάρων θηλαστικών, παρόμοια με εκείνη των βακτηριακών κυττάρων. Μεταβολές στην γονιδιακή έκφραση και τις τροποποιήσεις στην κυτταρική δομή, την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, η σταθερότητα του mRNA μπορούν να ανιχνευθούν σε κύτταρα θηλαστικών μετά από μία ώρα στους 32ºC. Εκτός από την άμεση επίδραση της κυτταρικής ανάπτυξης, οι μεταβολές της θερμοκρασίας επηρεάζουν επίσης το ρΗ των μέσων, καθώς η διαλυτότητα του CO2 μεταβάλλει το ρΗ (το ρΗ αυξάνει σε χαμηλότερες θερμοκρασίες). Τα καλλιεργημένα κύτταρα θηλαστικών μπορούν να ανεχθούν σημαντικές μειώσεις της θερμοκρασίας. Μπορούν να αποθηκευτούν στους 4 ° C για αρκετές ημέρες και μπορούν να ανεχθούν κατάψυξη στους -196 ° C (χρησιμοποιώντας τις κατάλληλες συνθήκες). Ωστόσο, δεν μπορούν να ανεχθούν θερμοκρασίες πάνω από περίπου 2 ° C πάνω από το κανονικό για περισσότερο από μερικές ώρες και θα πεθάνουν γρήγορα στους 40 ° C και άνω. Για να εξασφαλιστεί η μέγιστη αναπαραγωγιμότητα των αποτελεσμάτων, ακόμη και αν τα κύτταρα επιβιώνουν, πρέπει να ληφθεί μέριμνα για να διατηρηθεί η θερμοκρασία όσο το δυνατόν πιο σταθερή κατά τη διάρκεια της επώασης και του χειρισμού των κυττάρων εκτός του επωαστήρα.
Λόγοι για μεταβολές θερμοκρασίας μέσα στο επωαστήρα
Θα έχετε παρατηρήσει ότι όταν ανοίξει η πόρτα της φυτώρια, η θερμοκρασία πέφτει γρήγορα στην καθορισμένη τιμή των 37 ° C. Γενικά, η θερμοκρασία θα ανακάμψει μέσα σε λίγα λεπτά μετά την κλειστή η πόρτα. Στην πραγματικότητα, οι στατικοί πολιτισμοί χρειάζονται χρόνο για να ανακάμψουν στη θερμοκρασία καθορισμένης θερμοκρασίας. Ένας αριθμός παραγόντων μπορεί να επηρεάσει το χρόνο που χρειάζεται για μια κυτταρική καλλιέργεια για να ανακτήσει τη θερμοκρασία μετά τη θεραπεία εκτός του επωαστήρα. Αυτοί οι παράγοντες περιλαμβάνουν:
- ▶ Το χρονικό διάστημα που τα κύτταρα έχουν απομακρυνθεί από το φυτώριο
- ▶ Ο τύπος της φιάλης στον οποίο καλλιεργούνται τα κύτταρα (η γεωμετρία επηρεάζει τη μεταφορά θερμότητας)
- ▶ Αριθμός εμπορευματοκιβωτίων στο φυτώριο.
- ▶ Η άμεση επαφή των φιαλών με το χαλύβδινο ράφι επηρεάζει την ανταλλαγή θερμότητας και την ταχύτητα επίτευξης της βέλτιστης θερμοκρασίας, οπότε είναι καλύτερο να αποφύγετε τις στοίβες των φιαλών και να τοποθετήσετε κάθε σκάφος
- ▶ Απευθείαν στο ράφι του φυτώριου.
Η αρχική θερμοκρασία οποιουδήποτε φρέσκου δοχείων και μέσων που χρησιμοποιούνται θα επηρεάσουν επίσης το χρόνο που χρειάζεται για τα κύτταρα να βρίσκονται στη βέλτιστη κατάσταση τους. Όσο χαμηλότερη είναι η θερμοκρασία τους, τόσο περισσότερο χρειάζεται.
Εάν όλοι αυτοί οι παράγοντες αλλάξουν με την πάροδο του χρόνου, θα αυξήσουν επίσης τη μεταβλητότητα μεταξύ των πειραμάτων. Είναι απαραίτητο να ελαχιστοποιηθούν αυτές οι διακυμάνσεις της θερμοκρασίας, ακόμη και αν δεν είναι πάντοτε δυνατό να ελέγξουμε τα πάντα (ειδικά αν πολλοί άνθρωποι χρησιμοποιούν τον ίδιο εκκολαπτητικό).
Πώς να ελαχιστοποιήσετε τις μεταβολές της θερμοκρασίας και να μειώσετε τον χρόνο ανάκτησης της θερμοκρασίας
Προθερμάνοντας το μέσο
Ορισμένοι ερευνητές έχουν συνηθίσει να προωθήσουν ολόκληρα ολόκληρα μπουκάλια μέσων σε ένα λουτρό νερού 37 ° C για να τα φέρουν σε αυτή τη θερμοκρασία πριν από τη χρήση. Είναι επίσης δυνατή η προθερμάνετε το μέσο σε ένα φυτώριο που χρησιμοποιείται μόνο για μέση προθέρμανση και όχι για κυτταρική καλλιέργεια, όπου το μέσο μπορεί να φτάσει σε μια βέλτιστη θερμοκρασία χωρίς να διαταράξει τις κυτταρικές καλλιέργειες σε άλλο επωαστήρα. Αλλά αυτό, όσο γνωρίζουμε, συνήθως δεν είναι προσιτή δαπάνη.
Μέσα στο φυτώριο
Ανοίξτε την πόρτα του επωαστήρα όσο το δυνατόν λιγότερο και κλείστε την όσο πιο γρήγορα. Αποφύγετε τα κρύα σημεία, τα οποία δημιουργούν διαφορές θερμοκρασίας στο φυτώριο. Αφήστε το χώρο μεταξύ των φιαλών για να επιτρέψετε στον αέρα να κυκλοφορήσει. Τα ράφια μέσα στο φυτώριο μπορούν να είναι διάτρητα. Αυτό επιτρέπει την καλύτερη κατανομή θερμότητας καθώς επιτρέπει στον αέρα να διέρχεται από τις τρύπες. Ωστόσο, η παρουσία οπών μπορεί να οδηγήσει σε διαφορές στην κυτταρική ανάπτυξη, επειδή υπάρχει διαφορά θερμοκρασίας μεταξύ της περιοχής με οπές και της περιοχής με meta. Για τους λόγους αυτούς, εάν τα πειράματά σας απαιτούν εξαιρετικά ομοιόμορφη ανάπτυξη της κυτταρικής καλλιέργειας, μπορείτε να τοποθετήσετε τις φιάλες καλλιέργειας σε μεταλλικές υποστηρίξεις με μικρότερες επιφάνειες επαφής, οι οποίες συνήθως δεν είναι απαραίτητες στην κυτταρική καλλιέργεια ρουτίνας.
Ελαχιστοποίηση του χρόνου επεξεργασίας των κυττάρων
Για να ελαχιστοποιήσετε το χρόνο που ξοδεύετε στη διαδικασία επεξεργασίας των κυττάρων, πρέπει να
- ▶ Οργανώστε όλα τα απαραίτητα υλικά και εργαλεία προτού αρχίσετε να εργάζεστε.
- ▶ Εργαστείτε γρήγορα και ομαλά, αναθεωρώντας τις πειραματικές μεθόδους εκ των προτέρων, ώστε οι λειτουργίες σας να γίνουν επαναλαμβανόμενες και αυτοματοποιημένες.
- ▶ Ελαχιστοποίηση της επαφής υγρών με αέρα περιβάλλοντος.
- ▶ Διατηρήστε μια σταθερή θερμοκρασία στο εργαστήριο κυτταρικής καλλιέργειας όπου εργάζεστε.
Χρόνος δημοσίευσης: Ιαν-03-2024