Efecto de la variación de temperatura en el cultivo celular.
La temperatura es un parámetro importante en el cultivo celular porque afecta la reproducibilidad de los resultados.Los cambios de temperatura por encima o por debajo de 37°C tienen un efecto muy significativo en la cinética de crecimiento celular de las células de mamíferos, similar al de las células bacterianas.Los cambios en la expresión genética y las modificaciones en la estructura celular, la progresión del ciclo celular y la estabilidad del ARNm se pueden detectar en células de mamíferos después de una hora a 32ºC.Además de afectar directamente el crecimiento celular, los cambios de temperatura también afectan el pH del medio, ya que la solubilidad del CO2 altera el pH (el pH aumenta a temperaturas más bajas).Las células de mamíferos cultivadas pueden tolerar descensos significativos de temperatura.Se pueden almacenar a 4 °C durante varios días y pueden tolerar la congelación hasta -196 °C (si se utilizan las condiciones adecuadas).Sin embargo, no pueden tolerar temperaturas superiores a aproximadamente 2 °C por encima de lo normal durante más de unas pocas horas y morirán rápidamente a 40 °C o más.Para garantizar la máxima reproducibilidad de los resultados, incluso si las células sobreviven, se debe tener cuidado de mantener la temperatura lo más constante posible durante la incubación y manipulación de las células fuera de la incubadora.
Razones de las variaciones de temperatura dentro de la incubadora.
Habrá observado que cuando se abre la puerta de la incubadora, la temperatura desciende rápidamente hasta el valor ajustado de 37 °C.En general, la temperatura se recuperará unos minutos después de cerrar la puerta.De hecho, los cultivos estáticos necesitan tiempo para recuperarse a la temperatura establecida en la incubadora.Varios factores pueden afectar el tiempo que tarda un cultivo celular en recuperar la temperatura después del tratamiento fuera de la incubadora.Estos factores incluyen:
- ▶el tiempo que las células han estado fuera de la incubadora
- ▶el tipo de matraz en el que se cultivan las células (la geometría afecta la transferencia de calor)
- ▶Número de contenedores en la incubadora.
- ▶El contacto directo de los matraces con el estante de acero afecta el intercambio de calor y la velocidad para alcanzar la temperatura óptima, por lo que es mejor evitar amontonamientos de matraces y colocar cada recipiente
- ▶directamente en el estante de la incubadora.
La temperatura inicial de cualquier recipiente nuevo y medio utilizado también afectará el tiempo que tardan las células en estar en su estado óptimo;cuanto más baja sea su temperatura, más tiempo tardará.
Si todos estos factores cambian con el tiempo, también aumentarán la variabilidad entre experimentos.Es necesario minimizar estas fluctuaciones de temperatura, aunque no siempre es posible controlarlo todo (especialmente si varias personas utilizan la misma incubadora).
Cómo minimizar las variaciones de temperatura y reducir el tiempo de recuperación de la temperatura
Precalentando el medio
Algunos investigadores están acostumbrados a precalentar botellas enteras de medio en un baño de agua a 37 °C para llevarlas a esta temperatura antes de su uso.También es posible precalentar el medio en una incubadora que sólo se utiliza para precalentar el medio y no para el cultivo celular, donde el medio puede alcanzar una temperatura óptima sin alterar los cultivos celulares en otra incubadora.Pero esto, hasta donde sabemos, no suele ser un gasto asequible.
Dentro de la incubadora
Abra la puerta de la incubadora lo menos posible y ciérrela lo más rápido.Evite los puntos fríos, que crean diferencias de temperatura en la incubadora.Deje espacio entre los matraces para permitir que circule el aire.Los estantes del interior de la incubadora se pueden perforar.Esto permite una mejor distribución del calor ya que permite que el aire pase a través de los agujeros.Sin embargo, la presencia de agujeros puede provocar diferencias en el crecimiento celular, porque existe una diferencia de temperatura entre el área con agujeros y el área con meta.Por estos motivos, si sus experimentos requieren un crecimiento muy uniforme del cultivo celular, puede colocar los matraces de cultivo sobre soportes metálicos con superficies de contacto más pequeñas, que normalmente no son necesarias en el cultivo celular de rutina.
Minimizar el tiempo de procesamiento celular
Para minimizar el tiempo empleado en el proceso de tratamiento celular, es necesario
- ▶Organiza todos los materiales y herramientas necesarios antes de empezar a trabajar.
- ▶ Trabaje de forma rápida y fluida, revisando los métodos experimentales con antelación para que sus operaciones se vuelvan repetitivas y automatizadas.
- ▶Minimizar el contacto de líquidos con el aire ambiente.
- ▶Mantener una temperatura constante en el laboratorio de cultivo celular donde trabaja.
Hora de publicación: 18-ago-2023