中文
Temperatuuri variatsiooni mõju rakukultuurile
Temperatuur on rakukultuuris oluline parameeter, kuna see mõjutab tulemuste reprodutseeritavust. Temperatuurimuutustel üle 37 ° C on väga oluline mõju imetajarakkude rakkude kasvu kineetikale, sarnaselt bakterrakkude omaga. Geeniekspressiooni ja modifikatsioonide muutused raku struktuuris, rakutsükli progresseerumine, mRNA stabiilsus saab tuvastada imetajarakkudes ühe tunni pärast temperatuuril 32 ° C. Lisaks rakkude kasvu otseselt mõjutamisele mõjutavad temperatuuri muutused ka söötme pH -d, kuna süsinikdioksiidi lahustuvus muudab pH -d (pH suureneb madalamatel temperatuuridel). Kultiveeritud imetajarakud taluvad olulist temperatuuri langust. Neid saab säilitada temperatuuril 4 ° C mitu päeva ja nad võivad taluda külmumist temperatuurini -196 ° C (kasutades sobivaid tingimusi). Kuid nad ei talu temperatuure üle 2 ° C normaalsest kõrgemal kui paar tundi ja surevad kiiresti temperatuuril 40 ° C ja kõrgemal. Tulemuste maksimaalse reprodutseeritavuse tagamiseks, isegi kui rakud ellu jäävad, tuleb temperatuuri võimalikult konstantseks säilitada inkubaatori inkubaatori inkubeerimise ja käitlemise ajal.
Inkubaatori temperatuuri variatsioonide põhjused
Olete märganud, et kui inkubaatori uks avatakse, langeb temperatuur kiiresti seatud väärtuseni 37 ° C. Üldiselt taastub temperatuur mõne minuti jooksul pärast ukse sulgemist. Tegelikult vajavad staatilised kultuurid inkubaatoris seatud temperatuurile taastumiseks aega. Mitmed tegurid võivad mõjutada aega, mis kulub rakukultuuri temperatuuri taastamiseks pärast töötlemist väljaspool inkubaatorit. Nende tegurite hulka kuuluvad ：
- ▶ Rakud on inkubaatorist väljas olnud
- ▶ Kolbi tüüp, milles rakke kasvatatakse (geomeetria mõjutab soojusülekannet)
- ▶ inkubaatori konteinerite arv.
- ▶ Kolbide otsene kontakt terasriiuliga mõjutab soojusvahetust ja optimaalse temperatuuri jõudmise kiirust, seega on parem vältida kolbide virna ja asetada iga veresoon
- ▶ otse inkubaatori riiulil.
Kõigi värskete konteinerite ja kasutatavate söötmete algtemperatuur mõjutab ka rakkude optimaalses olekus kuluvat aega; Mida madalam nende temperatuur, seda kauem see võtab.
Kui kõik need tegurid aja jooksul muutuvad, suurendavad need ka katsete vahelist varieeruvust. Neid temperatuuri kõikumisi on vaja minimeerida, isegi kui pole alati võimalik kõike kontrollida (eriti kui mitu inimest kasutavad sama inkubaatorit).
Kuidas minimeerida temperatuuri variatsioone ja vähendada temperatuuri taastumisaega
Eelsoojendades meediumi
Mõned teadlased on harjunud tervete meediumite eelnemisega 37 ° C veevannis, et viia need enne kasutamist sellesse temperatuuri. Samuti on võimalik inkubaatoris olev sööde, mida kasutatakse ainult söödete eelsoojendamiseks, mitte rakukultuuris, kus sööde võib jõuda optimaalsele temperatuurile, häirimata rakukultuure teises inkubaatoris. Kuid niipalju kui me teame, pole tavaliselt taskukohane kulu.
Inkubaatori sees
Avage inkubaatori uks nii vähe kui võimalik ja sulgege see nii kiiresti. Vältige külmade laike, mis tekitavad temperatuuri erinevusi inkubaatoris. Jätke kolbide vahele ruumi, et õhk levitada. Inkubaatori sees olevaid riiulid saab perforeerida. See võimaldab soojuse paremat jaotust, kuna see võimaldab õhku aukudest läbi saada. Kuid aukude olemasolu võib põhjustada rakkude kasvu erinevusi, kuna aukudega ala ja metaga ala vahel on temperatuuri erinevus. Nendel põhjustel, kui teie katsed nõuavad rakukultuuri väga ühtlast kasvu, võite panna kultuurikolbid väiksemate kontaktpindadega metallitugidele, mis pole tavalises rakukultuuris tavaliselt vajalikud.
Rakkude töötlemise aja minimeerimine
Rakkude töötlemisprotsessis kulutuste minimeerimiseks peate seda tegema
- ▶ Korraldage enne töötamist kõik vajalikud materjalid ja tööriistad.
- ▶ Töötage kiiresti ja sujuvalt, vaadates katsemeetodeid eelnevalt läbi, et teie toimingud muutuksid korduvaks ja automatiseerituks.
- ▶ Minimeerige vedelike kontakti ümbritseva õhuga.
- ▶ säilitage püsiv temperatuur rakukultuuri laboris, kus töötate.
Postiaeg: jaanuar-03-2024