中文
Lämpötilan vaihtelun vaikutus soluviljelmään
Lämpötila on tärkeä parametri soluviljelmässä, koska se vaikuttaa tulosten toistettavuuteen. Lämpötilan muutoksilla 37 ° C: n yläpuolella tai alapuolella on erittäin merkittävä vaikutus nisäkkäiden solujen solujen kasvukinetiikkaan, samoin kuin bakteerisolujen. Geeniekspression muutokset ja solurakenteen modifikaatiot, solusyklin eteneminen, mRNA: n stabiilisuus voidaan havaita nisäkkäiden soluissa tunnin kuluttua 32ºC: ssa. Solujen kasvuun suoraan vaikuttamisen lisäksi lämpötilan muutokset vaikuttavat myös väliaineiden pH: hon, koska hiilidioksidin liukoisuus muuttaa pH: ta (pH kasvaa alhaisemmissa lämpötiloissa). Viljellyt nisäkkäiden solut voivat sietää merkittävää lämpötilaa. Niitä voidaan varastoida 4 ° C: ssa useita päiviä ja ne sietävät jäätymistä -196 ° C: seen (käyttämällä sopivia olosuhteita). Ne eivät kuitenkaan voi sietää noin 2 ° C: n lämpötiloja normaalin yläpuolelle yli muutaman tunnin ajan ja kuolevat nopeasti 40 ° C: ssa ja uudempiin. Tulosten maksimaalisen toistettavuuden varmistamiseksi, vaikka solut selviäisivät, lämpötilan ylläpitämiseksi on huolehdittava mahdollisimman vakiona inkubaattorin ulkopuolella olevien solujen inkubaation ja käsittelyn aikana.
Syyt inkubaattorin lämpötilan vaihteluihin
Olet huomannut, että kun inkubaattorin ovi avataan, lämpötila laskee nopeasti asetettuun arvoon 37 ° C. Yleensä lämpötila palautuu muutaman minuutin kuluessa oven sulkemisen jälkeen. Itse asiassa staattiset viljelmät tarvitsevat aikaa palautuakseen inkubaattorin asetetulle lämpötilaan. Useat tekijät voivat vaikuttaa siihen aikaan, joka kuluu soluviljelmän palauttamiseksi lämpötilaan inkubaattorin ulkopuolella. Nämä tekijät sisältävät ：
- ▶ Aika, jonka solut ovat olleet inkubaattorista
- ▶ Pullotyyppi, jossa soluja kasvatetaan (geometria vaikuttaa lämmönsiirtoon)
- ▶ Inkubaattorin säiliöiden lukumäärä.
- ▶ Kalvojen suora kosketus teräshyllyn kanssa vaikuttaa lämmönvaihtoon ja optimaalisen lämpötilan saavuttamisen nopeuteen, joten on parempi välttää pullojen pinot ja sijoittaa jokainen alus
- ▶ Suoraan inkubaattorin hyllyllä.
Kaikkien tuoreiden säiliöiden ja käytettyjen väliaineiden alkulämpötila vaikuttaa myös siihen aikaan, joka kuluu solujen optimaalisessa tilassa; Mitä pienempi niiden lämpötila, sitä pidempi se vie.
Jos kaikki nämä tekijät muuttuvat ajan myötä, ne lisäävät myös kokeiden välistä vaihtelua. Nämä lämpötilan vaihtelut on välttämätöntä minimoida, vaikka kaikkea ei aina ole mahdollista hallita (varsinkin jos useat ihmiset käyttävät samaa inkubaattoria).
Kuinka minimoida lämpötilan vaihtelut ja vähentää lämpötilan talteenottoaikaa
Esilämmittämällä väliaine
Jotkut tutkijat ovat tottuneet lämmittäviin kokonaisiin väliainepulloihin 37 ° C: n vesihauteessa, jotta ne saattaisiin lämpötilaan ennen käyttöä. Väliaine on myös mahdollista kuumentaa inkubaattorissa, jota käytetään vain väliaineen esilämmitykseen eikä soluviljelmään, missä väliaine voi saavuttaa optimaalisen lämpötilan häiritsemättä soluviljelmiä toisessa inkubaattorissa. Mutta tämä, sikäli kuin tiedämme, ei yleensä ole edullinen kustannus.
Inkubaattorin sisällä
Avaa inkubaattorin ovi mahdollisimman vähän ja sulje se niin nopeasti. Vältä kylmiä pisteitä, jotka luovat lämpötilaeroja inkubaattorissa. Jätä tilaa pullojen väliin, jotta ilma voi kiertää. Inkubaattorin sisällä olevat hyllyt voidaan rei'ittää. Tämä mahdollistaa paremman lämmönjakauman, koska se antaa ilmaa kulkea reikien läpi. Reikien esiintyminen voi kuitenkin johtaa solujen kasvueroja, koska reikien ja meta -alueen välillä on lämpötilaero. Näistä syistä, jos kokeilut vaativat soluviljelmän erittäin tasaista kasvua, voit sijoittaa viljelypullot metallitukiin pienemmillä kosketuspinnoilla, jotka eivät yleensä ole välttämättömiä rutiininomaisessa soluviljelmässä.
Minimoi solujen käsittelyaika
Soluhoitoprosessissa käytetyn ajan minimoimiseksi sinun täytyy
- ▶ Järjestä kaikki tarvittavat materiaalit ja työkalut ennen työskentelyn aloittamista.
- ▶ Työskentele nopeasti ja sujuvasti kokeellisten menetelmien tarkistaminen etukäteen niin, että toimintasi toistuvat ja automatisoivat.
- ▶ Minimoi nesteiden kosketus ympäristön ilmalla.
- ▶ Pidä vakio lämpötila soluviljelylaboratoriossa, jossa työskentelet.
Viestin aika: tammikuu-03-2024