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Effet de la variation de la température sur la culture cellulaire
La température est un paramètre important dans la culture cellulaire car il affecte la reproductibilité des résultats. Les changements de température supérieurs ou inférieurs à 37 ° C ont un effet très significatif sur la cinétique de croissance cellulaire des cellules de mammifères, similaire à celle des cellules bactériennes. Changements dans l'expression des gènes et les modifications de la structure cellulaire, la progression du cycle cellulaire, la stabilité de l'ARNm peuvent être détectées dans les cellules de mammifères après une heure à 32 ° C. En plus d'affecter directement la croissance cellulaire, les changements de température affectent également le pH du milieu, car la solubilité du CO2 modifie le pH (le pH augmente à des températures plus basses). Les cellules de mammifères cultivées peuvent tolérer une diminution de température significative. Ils peuvent être stockés à 4 ° C pendant plusieurs jours et peuvent tolérer la congélation à -196 ° C (en utilisant des conditions appropriées). Cependant, ils ne peuvent pas tolérer des températures supérieures à environ 2 ° C au-dessus de la normale pendant plus de quelques heures et mourront rapidement à 40 ° C et plus. Pour assurer une reproductibilité maximale des résultats, même si les cellules survivent, des soins doivent être pris pour maintenir la température aussi constante que possible pendant l'incubation et la manipulation des cellules à l'extérieur de l'incubateur.
Raisons des variations de température à l'intérieur de l'incubateur
Vous aurez remarqué que lorsque la porte de l'incubateur est ouverte, la température tombe rapidement à la valeur définie de 37 ° C. En général, la température se rétablira quelques minutes après la fermeture de la porte. En fait, les cultures statiques ont besoin de temps pour se remettre à la température définie dans l'incubateur. Un certain nombre de facteurs peuvent affecter le temps nécessaire à une culture cellulaire pour reprendre la température après un traitement en dehors de l'incubateur.Ces facteurs incluent ：
- ▶ La durée des cellules est hors de l'incubateur
- ▶ Le type de ballon dans lequel les cellules sont cultivées (la géométrie affecte le transfert de chaleur)
- ▶ Nombre de conteneurs dans l'incubateur.
- ▶ Le contact direct des flacons avec l'étagère en acier affecte l'échange de chaleur et la vitesse d'atteindre la température optimale, il est donc préférable d'éviter les piles de flacons et de placer chaque navire
- ▶ directement sur l'étagère de l'incubateur.
La température initiale de tous les conteneurs et supports frais utilisés affectera également le temps nécessaire pour que les cellules soient à leur état optimal; Plus leur température est basse, plus il faut longtemps.
Si tous ces facteurs changent avec le temps, ils augmenteront également la variabilité entre les expériences. Il est nécessaire de minimiser ces fluctuations de température, même s'il n'est pas toujours possible de tout contrôler (surtout si plusieurs personnes utilisent le même incubateur).
Comment minimiser les variations de température et réduire le temps de récupération de la température
En préchauffant le médium
Certains chercheurs sont habitués à la préchauffage de bouteilles entières de milieux dans un bain-marie à 37 ° C pour les amener à cette température avant utilisation. Il est également possible de préchauffer le milieu dans un incubateur qui n'est utilisé que pour le préchauffage moyen et non pour la culture cellulaire, où le milieu peut atteindre une température optimale sans déranger les cultures cellulaires dans un autre incubateur. Mais cela, pour autant que nous le sachions, n'est généralement pas une dépense abordable.
À l'intérieur de l'incubateur
Ouvrez la porte de l'incubateur le moins possible et fermez-le le plus rapidement. Évitez les taches froides, qui créent des différences de température dans l'incubateur. Laissez l'espace entre les flacons pour permettre à l'air de circuler. Les étagères à l'intérieur de l'incubateur peuvent être perforées. Cela permet une meilleure distribution de chaleur car il permet à l'air de traverser les trous. Cependant, la présence de trous peut entraîner des différences de croissance cellulaire, car il existe une différence de température entre la zone avec des trous et la zone avec Meta. Pour ces raisons, si vos expériences nécessitent une croissance très uniforme de la culture cellulaire, vous pouvez placer les flacons de culture sur les supports métalliques avec des surfaces de contact plus petites, qui ne sont généralement pas nécessaires dans la culture cellulaire de routine.
Minimiser le temps de traitement des cellules
Pour minimiser le temps de traitement du temps dans le processus de traitement cellulaire, vous devez
- ▶ Organisez tous les matériaux et outils nécessaires avant de commencer à travailler.
- ▶ Travaillez rapidement et en douceur, en examinant les méthodes expérimentales à l'avance afin que vos opérations deviennent répétitives et automatisées.
- ▶ Minimiser le contact des liquides avec l'air ambiant.
- ▶ Maintenez une température constante dans le laboratoire de culture cellulaire où vous travaillez.
Heure du poste: 18 août-2023