中文
Efecto da variación da temperatura no cultivo celular
A temperatura é un parámetro importante no cultivo celular porque afecta á reproducibilidade dos resultados. Os cambios de temperatura por encima ou por baixo dos 37 ° C teñen un efecto moi significativo na cinética de crecemento celular das células dos mamíferos, similar á das células bacterianas. Cambios na expresión xénica e modificacións na estrutura celular, a progresión do ciclo celular, a estabilidade do ARNm pódese detectar en células de mamíferos despois dunha hora a 32 ºC. Ademais de afectar directamente ao crecemento das células, os cambios na temperatura tamén afectan o pH dos medios de comunicación, xa que a solubilidade do CO2 altera o pH (aumenta o pH a temperaturas máis baixas). As células de mamíferos cultivados poden tolerar diminución da temperatura significativa. Pódense almacenar a 4 ° C durante varios días e poden tolerar a conxelación a -196 ° C (usando condicións apropiadas). Non obstante, non poden tolerar temperaturas por encima de aproximadamente 2 ° C por encima do normal durante máis dunhas horas e morrerán rapidamente a 40 ° C e por riba. Para garantir a máxima reproducibilidade dos resultados, aínda que as células sobreviven, hai que ter coidado para manter a temperatura o máis constante posible durante a incubación e manipulación das células fóra da incubadora.
Razóns para as variacións de temperatura dentro da incubadora
Notarás que cando se abre a porta da incubadora, a temperatura cae rapidamente ata o valor definido de 37 ° C. En xeral, a temperatura recuperarase aos poucos minutos despois de que a porta estea pechada. De feito, as culturas estáticas necesitan tempo para recuperarse á temperatura establecida na incubadora. Varios factores poden afectar o tempo que leva un cultivo celular para recuperar a temperatura despois do tratamento fóra da incubadora. Estes factores inclúen ：
- ▶ O tempo que as células quedaron fóra da incubadora
- ▶ O tipo de matraz no que se cultivan as células (a xeometría afecta á transferencia de calor)
- ▶ Número de contedores na incubadora.
- ▶ O contacto directo dos frascos coa estantería de aceiro afecta ao intercambio de calor e á velocidade de alcanzar a temperatura óptima, polo que é mellor evitar pilas de frascos e colocar cada embarcación
- ▶ Directamente no andel da incubadora.
A temperatura inicial de calquera recipiente fresco e medios empregados tamén afectará o tempo que tarda en que as células estean no seu estado óptimo; Canto menor a súa temperatura, máis tempo leva.
Se todos estes factores cambian co paso do tempo, tamén aumentarán a variabilidade entre experimentos. É necesario minimizar estas flutuacións de temperatura, aínda que non sempre sexa posible controlar todo (especialmente se varias persoas usan a mesma incubadora).
Como minimizar as variacións de temperatura e reducir o tempo de recuperación da temperatura
Ao precalentar o medio
Algúns investigadores están acostumados a pre-quentamento de botellas enteiras de medios nun baño de auga de 37 ° C para levalos a esta temperatura antes do uso. Tamén é posible precalentar o medio nunha incubadora que só se usa para o precalentamento medio e non para o cultivo celular, onde o medio pode alcanzar unha temperatura óptima sen perturbar os cultivos celulares noutra incubadora. Pero isto, polo que sabemos, normalmente non é un gasto accesible.
Dentro da incubadora
Abre a porta da incubadora o menos posible e pechala o máis rápido. Evite os puntos fríos, que crean diferenzas de temperatura na incubadora. Deixar o espazo entre os frascos para permitir que o aire circule. Os andeis dentro da incubadora pódense perforar. Isto permite unha mellor distribución de calor xa que permite que o aire pase polos buracos. Non obstante, a presenza de buracos pode levar a diferenzas no crecemento das células, porque hai unha diferenza de temperatura entre a área con buracos e a área con meta. Por estas razóns, se os teus experimentos requiren un crecemento altamente uniforme da cultura celular, podes colocar os frascos de cultivo en soportes metálicos con superficies de contacto máis pequenas, que normalmente non son necesarias no cultivo de células rutineiras.
Minimizar o tempo de procesamento de células
Para minimizar o tempo de gastar no proceso de tratamento celular, ten que facelo
- ▶ Organizar todos os materiais e ferramentas necesarias antes de comezar a traballar.
- ▶ Funciona con rapidez e suavidade, revisando os métodos experimentais con antelación para que as túas operacións sexan repetitivas e automatizadas.
- ▶ Minimizar o contacto de líquidos con aire ambiente.
- ▶ Manter unha temperatura constante no laboratorio de cultivo celular onde traballa.
Tempo de publicación: xaneiro-03-2024