中文
Učinak varijacije temperature na staničnu kulturu
Temperatura je važan parametar u staničnoj kulturi jer utječe na obnovljivost rezultata. Promjene temperature iznad ili ispod 37 ° C imaju vrlo značajan utjecaj na kinetiku rasta stanica stanica sisavaca, slično kao u bakterijskim stanicama. Promjene ekspresije i modifikacije gena u staničnoj strukturi, progresiji staničnog ciklusa, stabilnost mRNA može se otkriti u stanicama sisavaca nakon jednog sata na 32 ° C. Osim što izravno utječe na rast stanica, promjene temperature također utječu na pH medija, jer topljivost CO2 mijenja pH (pH se povećava na nižim temperaturama). Kultivirane stanice sisavaca mogu tolerirati značajno smanjenje temperature. Oni se mogu čuvati na 4 ° C nekoliko dana i mogu tolerirati zamrzavanje na -196 ° C (koristeći odgovarajuće uvjete). Međutim, one ne mogu tolerirati temperature iznad oko 2 ° C iznad normalne više od nekoliko sati i brzo će umrijeti na 40 ° C i više. Da bi se osigurala maksimalna obnovljivost rezultata, čak i ako stanice prežive, potrebno je paziti na održavanje temperature što je moguće konstantnije tijekom inkubacije i rukovanja stanica izvan inkubatora.
Razlozi temperaturnih varijacija unutar inkubatora
Primijetili ćete da kada se otvori vrata inkubatora, temperatura brzo pada na postavljenu vrijednost od 37 ° C. Općenito, temperatura će se oporaviti u roku od nekoliko minuta nakon zatvaranja vrata. U stvari, statičkim kulturama treba vremena da se oporavi do zadane temperature u inkubatoru. Brojni čimbenici mogu utjecati na vrijeme koje je potrebno da stanična kultura povrati temperaturu nakon liječenja izvan inkubatora. Ovi čimbenici uključuju:
- ▶ Duljina vremena koje su stanice bile izvan inkubatora
- ▶ Vrsta tikvice u kojoj se stanice uzgajaju (geometrija utječe na prijenos topline)
- ▶ Broj spremnika u inkubatoru.
- ▶ Izravni kontakt tikvica sa čeličnom policom utječe na razmjenu topline i brzinu postizanja optimalne temperature, tako da je bolje izbjegavati hrpe tikvica i postaviti svaku plovicu
- ▶ izravno na polici inkubatora.
Početna temperatura bilo kojih svježih spremnika i medija također će utjecati na vrijeme koje je potrebno da ćelije biti u njihovom optimalnom stanju; Što je niža temperatura, to je duže.
Ako se svi ti faktori vremenom promijene, također će povećati varijabilnost između eksperimenata. Potrebno je umanjiti ove temperaturne fluktuacije, čak i ako nije uvijek moguće kontrolirati sve (pogotovo ako nekoliko ljudi koristi isti inkubator).
Kako minimizirati temperaturne varijacije i smanjiti vrijeme oporavka temperature
Zagrijavanjem medija
Neki su istraživači navikli unaprijed zagrijati cijele boce medija u vodenoj kupelji od 37 ° C kako bi ih doveli na tu temperaturu prije upotrebe. Također je moguće zagrijati medij u inkubatoru koji se koristi samo za srednje predgrijavanje, a ne za staničnu kulturu, gdje medij može dostići optimalnu temperaturu bez ometanja staničnih kultura u drugom inkubatoru. Ali to, koliko znamo, obično nije pristupačan trošak.
Unutar inkubatora
Otvorite vrata inkubatora što je manje moguće i zatvorite što je brže. Izbjegavajte hladne točke, koje stvaraju temperaturne razlike u inkubatoru. Ostavite prostor između tikvica kako biste omogućili cirkuliranje zraka. Police unutar inkubatora mogu se perforirati. To omogućava bolju raspodjelu topline jer omogućava da zrak prođe kroz rupe. Međutim, prisutnost rupa može dovesti do razlika u rastu stanica, jer postoji temperaturna razlika između područja s rupama i područja s meta. Iz tih razloga, ako vaši eksperimenti zahtijevaju vrlo ujednačen rast stanične kulture, kulturne tikvice možete postaviti na metalne nosače s manjim kontaktnim površinama, koje obično nisu potrebne u rutinskoj staničnoj kulturi.
Minimiziranje vremena obrade ćelije
Da biste smanjili vremensku potrošnju u procesu liječenja stanica, morate
- ▶ Organizirajte sve potrebne materijale i alate prije nego što počnete raditi.
- ▶ Radite brzo i glatko, unaprijed pregledavajući eksperimentalne metode kako bi se vaše operacije ponavljale i automatizirale.
- ▶ Minimizirajte kontakt tekućine s ambijentalnim zrakom.
- ▶ Održavajte konstantnu temperaturu u laboratoriju stanične kulture u kojem radite.
Post Vrijeme: siječanj-03-2024