中文
Áhrif hitastigsbreytileika á frumurækt
Hitastig er mikilvægur færibreytur í frumurækt vegna þess að það hefur áhrif á fjölföldun niðurstaðna. Hitastigsbreytingar yfir eða undir 37 ° C hafa mjög marktæk áhrif á frumuvöxt frumna í spendýrafrumum, svipað og í bakteríum. Breytingar á tjáningu gena og breytingum í frumubyggingu, framvindu frumna, mRNA stöðugleika er hægt að greina í spendýrafrumum eftir eina klukkustund við 32 ° C. Auk þess að hafa bein áhrif á frumuvöxt hafa breytingar á hitastigi einnig áhrif á sýrustig miðlunarinnar, þar sem leysni CO2 breytir pH (pH eykst við lægra hitastig). Ræktaðar spendýrafrumur þolir verulegan hitastig. Hægt er að geyma þau við 4 ° C í nokkra daga og þola frystingu í -196 ° C (með því að nota viðeigandi aðstæður). Hins vegar þolir þeir ekki hitastig yfir um það bil 2 ° C yfir venjulegu í meira en nokkrar klukkustundir og deyja fljótt við 40 ° C og yfir. Til að tryggja hámarks fjölföldun niðurstaðna, jafnvel þó að frumurnar lifi, þarf að gæta þess að viðhalda hitastiginu eins stöðugt og mögulegt er við ræktun og meðhöndlun frumanna utan útungunarstöðvarinnar.
Ástæður fyrir hitastigafbrigði inni í útungunarstöðinni
Þú munt hafa tekið eftir því að þegar útungunarhurðin er opnuð lækkar hitastigið hratt að stillt gildi 37 ° C. Almennt mun hitastigið ná sér innan nokkurra mínútna eftir að hurðinni er lokað. Reyndar þurfa kyrrstæðar ræktanir tíma til að jafna sig á stilltu hitastiginu í útungunarstöðinni. Fjöldi þátta getur haft áhrif á þann tíma sem það tekur fyrir frumurækt að ná aftur hitastigi eftir meðferð utan útungunarstöðvarinnar.Þessir þættir fela í sér ：
- ▶ Tíminn sem frumurnar hafa verið úr útungunarstöðinni
- ▶ Gerð kolbu sem frumurnar eru ræktaðar í (rúmfræði hefur áhrif á hitaflutning)
- ▶ Fjöldi gáma í útungunarstöðinni.
- ▶ Bein snerting flöskanna við stálhilla hefur áhrif á hitaskipti og hraða þess að ná besta hitastigi, svo það er betra að forðast stafla af flöskum og setja hvert skip
- ▶ Beint á hillu útungunarstöðvarinnar.
Upphafshiti allra ferskra gáma og fjölmiðla sem notaðir eru mun einnig hafa áhrif á þann tíma sem það tekur frumurnar að vera í þeirra besta ástandi; Því lægra sem hitastigið er, því lengur sem það tekur.
Ef allir þessir þættir breytast með tímanum munu þeir einnig auka breytileika milli tilrauna. Nauðsynlegt er að lágmarka þessar hitasveiflur, jafnvel þó að það sé ekki alltaf mögulegt að stjórna öllu (sérstaklega ef nokkrir nota sama útungunarvélina).
Hvernig á að lágmarka hitastigsbreytileika og draga úr hitastigsbata tíma
Með því að forhita miðilinn
Sumir vísindamenn eru vanir að hlýna heilum flöskum af miðlum í 37 ° C vatnsbaði til að koma þeim í þetta hitastig fyrir notkun. Það er einnig mögulegt að forhita miðilinn í útungunarvél sem er aðeins notaður til miðlungs forhitun og ekki fyrir frumurækt, þar sem miðillinn getur náð besta hitastigi án þess að trufla frumuræktina í öðrum útungunarvél. En þetta, að svo miklu leyti sem við vitum, er venjulega ekki hagkvæmur kostnaður.
Inni í útungunarstöðinni
Opnaðu útungunarhurðina eins lítið og mögulegt er og lokaðu henni eins fljótt. Forðastu kalda bletti, sem skapa hitastigsmun á útungunarstöðinni. Skildu pláss á milli flöskanna til að leyfa loft að streyma. Hægt er að gata í hillurnar inni í útungunarstöðinni. Þetta gerir ráð fyrir betri hitadreifingu þar sem það gerir loft kleift að fara í gegnum götin. Hins vegar getur nærvera göts leitt til munar á frumuvöxt, vegna þess að það er hitamismunur á svæðinu með götum og svæðinu með Meta. Af þessum ástæðum, ef tilraunir þínar þurfa mjög einsleitan vöxt frumuræktarinnar, geturðu sett ræktunarflasið á málmstoð með minni snertiflötum, sem eru venjulega ekki nauðsynleg í venjubundinni frumurækt.
Lágmarka vinnslutíma frumna
Til að lágmarka tíma eyðsluna í frumumeðferðarferli þarftu að
- ▶ Skipuleggðu öll nauðsynleg efni og verkfæri áður en þú byrjar að vinna.
- ▶ Vinna fljótt og vel og fara yfir tilraunir fyrirfram svo að rekstur þinn verði endurtekinn og sjálfvirk.
- ▶ Lágmarkaðu snertingu vökva við umhverfisloft.
- ▶ Halda stöðugu hitastigi í frumuræktarstofunni þar sem þú vinnur.
Pósttími: Ágúst-18-2023