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Effetto della variazione di temperatura sulla coltura cellulare
La temperatura è un parametro importante nella coltura cellulare perché influisce sulla riproducibilità dei risultati. I cambiamenti di temperatura sopra o inferiore a 37 ° C hanno un effetto molto significativo sulla cinetica di crescita cellulare delle cellule di mammifero, simile a quella delle cellule batteriche. Cambiamenti nell'espressione genica e modifiche nella struttura cellulare, progressione del ciclo cellulare, stabilità dell'mRNA può essere rilevata nelle cellule di mammifero dopo un'ora a 32 ° C. Oltre a influenzare direttamente la crescita cellulare, i cambiamenti di temperatura influiscono anche il pH del media, poiché la solubilità della CO2 altera il pH (il pH aumenta a temperature più basse). Le cellule di mammifero in coltura possono tollerare una significativa riduzione della temperatura. Possono essere conservati a 4 ° C per diversi giorni e possono tollerare il congelamento a -196 ° C (usando condizioni appropriate). Tuttavia, non possono tollerare temperature superiori a circa 2 ° C al di sopra del normale per più di poche ore e moriranno rapidamente a 40 ° C e oltre. Per garantire la massima riproducibilità dei risultati, anche se le cellule sopravvivono, è necessario prestare attenzione per mantenere la temperatura il più costante possibile durante l'incubazione e la gestione delle cellule al di fuori dell'incubatrice.
Motivi per le variazioni di temperatura all'interno dell'incubatrice
Avrai notato che quando viene aperta la porta dell'incubatrice, la temperatura scende rapidamente al valore impostato di 37 ° C. In generale, la temperatura si riprenderà entro pochi minuti dalla chiusura della porta. In effetti, le colture statiche hanno bisogno di tempo per riprendersi alla temperatura impostata nell'incubatrice. Numerosi fattori possono influire sul tempo impiegato per una coltura cellulare per riprendere la temperatura dopo il trattamento al di fuori dell'incubatrice. Questi fattori includono ：
- ▶ Il periodo di tempo in cui le cellule sono state fuori dall'incubatore
- ▶ Il tipo di pallone in cui vengono coltivate le celle (la geometria influisce sul trasferimento di calore)
- ▶ Numero di contenitori nell'incubatore.
- ▶ Il contatto diretto delle boccette con lo scaffale in acciaio influisce sullo scambio di calore e la velocità di raggiungere la temperatura ottimale, quindi è meglio evitare pile di boccette e posizionare ogni nave
- ▶ Direttamente sullo scaffale dell'incubatore.
La temperatura iniziale di eventuali contenitori freschi e media utilizzati influenzerà anche il tempo impiegato alle cellule al loro stato ottimale; Più bassa è la loro temperatura, più ci vuole.
Se tutti questi fattori cambiano nel tempo, aumenteranno anche la variabilità tra gli esperimenti. È necessario ridurre al minimo queste fluttuazioni di temperatura, anche se non è sempre possibile controllare tutto (specialmente se diverse persone utilizzano lo stesso incubatore).
Come ridurre al minimo le variazioni di temperatura e ridurre i tempi di recupero della temperatura
Preriscaldando il mezzo
Alcuni ricercatori sono abituati a bottiglie integrali preriscaldanti in un bagno d'acqua di 37 ° C per portarli a questa temperatura prima dell'uso. È anche possibile preriscaldare il mezzo in un incubatore che viene utilizzato solo per il preriscaldamento del mezzo e non per la coltura cellulare, in cui il mezzo può raggiungere una temperatura ottimale senza disturbare le colture cellulari in un altro incubatore. Ma questo, per quanto ne sappiamo, di solito non è una spesa economica.
All'interno dell'incubatore
Apri la porta dell'incubatrice il meno possibile e chiuderla il più rapidamente. Evita i punti freddi, che creano differenze di temperatura nell'incubatore. Lasciare spazio tra le boccette per consentire all'aria di circolare. Gli scaffali all'interno dell'incubatore possono essere perforati. Ciò consente una migliore distribuzione del calore in quanto consente all'aria di passare attraverso i fori. Tuttavia, la presenza di fori può portare a differenze nella crescita cellulare, poiché esiste una differenza di temperatura tra l'area con fori e l'area con meta. Per questi motivi, se i tuoi esperimenti richiedono una crescita altamente uniforme della coltura cellulare, è possibile posizionare le boccette di coltura su supporti metallici con superfici di contatto più piccole, che di solito non sono necessarie nella coltura cellulare di routine.
Minimizzare il tempo di elaborazione delle cellule
Per ridurre al minimo la spesa del tempo nel processo di trattamento cellulare, è necessario
- ▶ Organizzare tutti i materiali e gli strumenti necessari prima di iniziare a lavorare.
- ▶ Lavorare in modo rapido e fluido, rivedendo in anticipo i metodi sperimentali in modo che le operazioni diventino ripetitive e automatizzate.
- ▶ Ridurre al minimo il contatto dei liquidi con aria ambiente.
- ▶ Mantenere una temperatura costante nel laboratorio di coltura cellulare in cui lavori.
Tempo post: gennaio-03-2024