中文
השפעת וריאציה של טמפרטורה על תרבית התא
הטמפרטורה היא פרמטר חשוב בתרבית התאים מכיוון שהיא משפיעה על ההתרבות של התוצאות. לשינויי טמפרטורה מעל או מתחת ל 37 מעלות צלזיוס יש השפעה משמעותית מאוד על קינטיקה של צמיחת התאים של תאי יונקים, בדומה לזה של תאי חיידקים. שינויים בביטוי הגנים ובשינויים במבנה הסלולרי, התקדמות מחזור התאים, ניתן לאתר יציבות mRNA בתאי יונקים לאחר שעה על 32 מעלות צלזיוס. בנוסף להשפעה ישירה על צמיחת התאים, שינויים בטמפרטורה משפיעים גם על ה- pH של המדיה, שכן המסיסות של CO2 משנה את ה- pH (pH עולה בטמפרטורות נמוכות יותר). תאי יונקים מתורבתים יכולים לסבול ירידות טמפרטורה משמעותיות. ניתן לאחסן אותם ב -4 מעלות צלזיוס למשך מספר ימים ויכולים לסבול הקפאה ל -196 מעלות צלזיוס (בתנאים מתאימים). עם זאת, הם אינם יכולים לסבול טמפרטורות מעל 2 מעלות צלזיוס מעל הרגיל במשך יותר מכמה שעות וימותו במהירות ב 40 מעלות צלזיוס ומעלה. כדי להבטיח את ההתרבות המרבית של התוצאות, גם אם התאים שורדים, יש להקפיד על השמירה על הטמפרטורה קבועה ככל האפשר במהלך הדגירה והטיפול בתאים מחוץ לחממה.
סיבות לווריאציות טמפרטורה בתוך החממה
הבחנת כי כאשר נפתחת דלת החממה, הטמפרטורה יורדת במהירות לערך הקבוע של 37 מעלות צלזיוס. באופן כללי, הטמפרטורה תתאושש תוך מספר דקות לאחר סגירת הדלת. למעשה, תרבויות סטטיות צריכות זמן להתאושש לטמפרטורת הקבוע בחממה. מספר גורמים יכולים להשפיע על הזמן שלוקח לתרבית תאים להחזיר את הטמפרטורה לאחר הטיפול מחוץ לחממה. גורמים אלה כוללים ：
- ▶ משך הזמן בו התאים יצאו מהחממה
- ▶ סוג הבקבוק בו מגדלים התאים (הגיאומטריה משפיעה על העברת חום)
- ▶ מספר המכולות בחממה.
- ▶ מגע ישיר של הצלוחיות עם מדף הפלדה משפיע על חילופי החום ועל המהירות של הגעה לטמפרטורה האופטימלית, ולכן עדיף להימנע מערמות של צלוחיות ולהציב כל כלי שיט
- ▶ ישירות על מדף החממה.
הטמפרטורה הראשונית של כל מכולות טריות ומדיה המשמשת תשפיע גם על הזמן שלוקח לתאים להיות במצב האופטימלי שלהם; ככל שהטמפרטורה שלהם נמוכה יותר, כך נדרש זמן רב יותר.
אם כל הגורמים הללו ישתנו עם הזמן, הם גם יגדילו את השונות בין ניסויים. יש צורך למזער את תנודות הטמפרטורה הללו, גם אם לא תמיד ניתן לשלוט על הכל (במיוחד אם כמה אנשים משתמשים באותה חממה).
כיצד למזער וריאציות טמפרטורה ולהפחית את זמן התאוששות הטמפרטורה
על ידי חימום מראש של המדיום
חלק מהחוקרים רגילים לחמם מראש בקבוקי מדיה שלמים באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס כדי להביא אותם לטמפרטורה זו לפני השימוש. ניתן גם לחמם מראש את המדיום בחממה המשמשת רק לחימום בינוני ולא לתרבית תאים, כאשר המדיום יכול להגיע לטמפרטורה אופטימלית מבלי להפריע לתרבויות התא בחממה אחרת. אבל זה, עד כמה שידוע לנו, זה בדרך כלל לא הוצאה סבירה.
בתוך החממה
פתח את דלת החממה כמה שפחות וסגור אותה במהירות. הימנע כתמים קרים, היוצרים הבדלי טמפרטורה בחממה. השאירו שטח בין הצלוחיות כדי לאפשר לאוויר להסתובב. ניתן לחבר את המדפים בתוך החממה. זה מאפשר חלוקת חום טובה יותר מכיוון שהיא מאפשרת לאוויר לעבור דרך החורים. עם זאת, נוכחות חורים יכולה להוביל להבדלים בצמיחת התאים, מכיוון שיש הבדל טמפרטורה בין האזור עם חורים לאזור עם מטא. מסיבות אלה, אם הניסויים שלך דורשים צמיחה אחידה מאוד של תרבית התאים, אתה יכול למקם את בקבוקי התרבות על תומכי מתכת עם משטחי מגע קטנים יותר, שלרוב אינם נחוצים בתרבית תאים שגרתית.
צמצום זמן עיבוד התאים
כדי למזער את זמן ההוצאה בתהליך הטיפול בתאים, אתה צריך
- ▶ ארגן את כל החומרים והכלים הדרושים לפני שתתחיל לעבוד.
- ▶ עבדו במהירות ובחלקה, תוך סקירת שיטות ניסוי מראש כך שהפעולות שלכם יחזרו על עצמן ואוטומטיות.
- ▶ צמצם מגע של נוזלים עם אוויר הסביבה.
- ▶ שמור טמפרטורה קבועה במעבדת תרבית התאים בה אתה עובד.
זמן ההודעה: ינואר 03-2024