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세포 배양에 대한 온도 변화의 영향
온도는 결과의 재현성에 영향을 미치기 때문에 세포 배양에서 중요한 매개 변수입니다. 37 ℃ 이하의 온도 변화는 박테리아 세포와 유사한 포유 동물 세포의 세포 성장 동역학에 매우 중요한 영향을 미친다. 세포 구조, 세포주기 진행, mRNA 안정성의 유전자 발현 및 변형의 변화는 32ºC에서 1 시간 후 포유 동물 세포에서 검출 될 수있다. CO2의 용해도가 pH를 변화시키기 때문에 온도의 변화는 세포 성장에 직접적인 영향을 미치는 것 외에도 배지의 pH에 영향을 미칩니다 (pH가 더 낮은 온도에서 증가). 배양 된 포유 동물 세포는 상당한 온도 감소를 견딜 수 있습니다. 며칠 동안 4 ° C에서 저장 될 수 있으며 동결을 -196 ° C로 견딜 수 있습니다 (적절한 조건 사용). 그러나, 그들은 몇 시간 이상 정상보다 약 2 ° C 이상의 온도를 견딜 수 없으며 40 ° C 이상에서 빠르게 죽을 것입니다. 결과의 최대 재현성을 보장하기 위해, 세포가 생존하더라도 인큐베이터 외부의 세포의 배양 및 취급 동안 가능한 한 일정하게 온도를 유지하기 위해주의를 기울여야한다.
인큐베이터 내부의 온도 변화 이유
인큐베이터 도어가 열리면 온도가 37 ° C의 설정 값으로 빠르게 떨어집니다. 일반적으로 도어가 닫힌 후 몇 분 안에 온도가 회복됩니다. 실제로, 정적 배양은 인큐베이터의 정해진 온도로 회복하는 데 시간이 필요합니다. 인큐베이터 외부의 처리 후 세포 배양이 온도를 회복하는 데 걸리는 시간에 영향을 줄 수 있습니다.이 요인에는 다음이 포함됩니다.
- ▶ 세포가 인큐베이터에서 벗어난 시간
- ▶ 셀이 자라는 플라스크의 유형 (지오메트리는 열 전달에 영향을 미칩니다)
- ▶ 인큐베이터의 용기 수.
- ▶ 플라스크와 스틸 선반의 직접 접촉은 열 교환 및 최적의 온도에 도달하는 속도에 영향을 미치므로 플라스크 스택을 피하고 각 용기를 배치하는 것이 좋습니다.
- ▶ 인큐베이터의 선반에 직접.
사용 된 신선한 용기 및 미디어의 초기 온도는 또한 세포가 최적의 상태에있는 데 걸리는 시간에 영향을 미칩니다. 온도가 낮을수록 시간이 길어집니다.
이러한 모든 요소가 시간이 지남에 따라 변하면 실험 간의 변동성을 증가시킵니다. 모든 것을 제어 할 수있는 것은 아니더라도 (특히 여러 사람이 동일한 인큐베이터를 사용하는 경우) 이러한 온도 변동을 최소화해야합니다.
온도 변화를 최소화하고 온도 회복 시간을 줄이는 방법
매체를 예열함으로써
일부 연구자들은 37 ° C 수조에서 전체 미디어 병을 미리 비난하여 사용하기 전에이 온도로 가져 오는 데 익숙합니다. 세포 배양에만 사용되지 않고 배지 예열에만 사용되는 인큐베이터에서 배지를 예열하는 것도 가능하며, 매체는 다른 인큐베이터에서 세포 배양을 방해하지 않고 최적의 온도에 도달 할 수 있습니다. 그러나 이것은 우리가 아는 한 일반적으로 저렴한 비용이 아닙니다.
인큐베이터 내부
인큐베이터 도어를 최대한 적게 열고 빨리 닫습니다. 인큐베이터의 온도 차이를 만드는 차가운 반점을 피하십시오. 플라스크 사이에 공간을두고 공기가 순환되도록하십시오. 인큐베이터 내부의 선반은 천공 될 수 있습니다. 이를 통해 공기가 구멍을 통과 할 수 있으므로 더 나은 열 분포가 가능합니다. 그러나 구멍의 존재는 구멍이있는 영역과 메타가있는 영역 사이에 온도 차이가 있기 때문에 세포 성장의 차이를 초래할 수 있습니다. 이러한 이유로, 실험이 세포 배양의 균일 한 성장이 필요한 경우, 일반적으로 일상적인 세포 배양에서는 필요하지 않은 작은 접촉 표면으로 금속 지지대에 배양 플라스크를 배치 할 수 있습니다.
셀 처리 시간을 최소화합니다
세포 처리 과정에서 시간을 보내려면
- ▶ 작업을 시작하기 전에 필요한 모든 재료와 도구를 구성하십시오.
- ▶ 빠르고 매끄럽게 작업하여 실험 방법을 미리 검토하여 작업이 반복되고 자동화되도록합니다.
- ▶ 주변 공기와 액체의 접촉을 최소화하십시오.
- ▶ 일하는 세포 배양 실험실에서 일정한 온도를 유지하십시오.
후 시간 : 1 월 -03-2024