中文
Temperatūros pokyčių poveikis ląstelių kultūrai
Temperatūra yra svarbus ląstelių kultūros parametras, nes jis turi įtakos rezultatų atkuriamumui. Temperatūros pokyčiai didesni nei 37 ° C temperatūra daro labai reikšmingą poveikį žinduolių ląstelių ląstelių augimo kinetikai, panašiai kaip bakterijų ląstelės. Genų ekspresijos pokyčiai ir ląstelių struktūros modifikacijos, ląstelių ciklo progresavimas, mRNR stabilumas gali būti aptikti žinduolių ląstelėse po valandos 32ºC. Temperatūros pokyčiai ne tik tiesiogiai paveikia ląstelių augimą, bet ir įtakoja terpės pH, nes CO2 tirpumas keičia pH (pH padidėja esant žemesnei temperatūrai). Kultūrinės žinduolių ląstelės gali toleruoti reikšmingą temperatūrą. Jie gali būti laikomi 4 ° C temperatūroje keletą dienų ir gali toleruoti užšalimą iki -196 ° C (naudojant tinkamas sąlygas). Tačiau daugiau nei kelias valandas jie negali toleruoti aukštesnės nei 2 ° C temperatūros, aukštesnės nei normalios ir greitai mirs 40 ° C temperatūroje ir aukštesnėje. Norint užtikrinti maksimalų rezultatų atkuriamumą, net jei ląstelės išgyvena, reikia pasirūpinti, kad temperatūra būtų kuo pastovesnė inkubuojant ir tvarkant ląsteles, esančias už inkubatoriaus ribų.
Temperatūros pokyčių priežastys inkubatoriuje
Jūs pastebėsite, kad atidarius inkubatoriaus duris, temperatūra greitai sumažėja iki nustatytos vertės 37 ° C. Apskritai, temperatūra atsigaus per kelias minutes po to, kai durys bus uždarytos. Tiesą sakant, statinėms kultūroms reikia laiko atsigauti iki nustatytos inkubatoriaus temperatūros. Keletas veiksnių gali turėti įtakos tam, ko reikia ląstelių kultūrai, kad būtų galima atgauti temperatūrą po gydymo ne inkubatoriuje. Šie veiksniai apima ：
- ▶ Per ilgą laiką ląstelės buvo iš inkubatoriaus
- ▶ Kolbos tipas, kuriame auginamos ląstelės (geometrija veikia šilumos perdavimą)
- ▶ konteinerių skaičius inkubatoriuje.
- ▶ Tiesioginis kolbų kontaktas su plienine lentyna veikia šilumos mainus ir greitį pasiekti optimalią temperatūrą, todėl geriau vengti kolbų krūvų ir sudėti kiekvieną indą
- ▶ tiesiai ant inkubatoriaus lentynos.
Pradinė bet kokių šviežių konteinerių ir naudojamų terpių temperatūra taip pat turės įtakos tam, ko reikia, kad ląstelės būtų optimalios būsenos; Kuo žemesnė jų temperatūra, tuo ilgiau reikia.
Jei visi šie veiksniai laikui bėgant pasikeis, jie taip pat padidins eksperimentų kintamumą. Būtina sumažinti šiuos temperatūros svyravimus, net jei ne visada įmanoma viską valdyti (ypač jei keli žmonės naudoja tą patį inkubatorių).
Kaip sumažinti temperatūros pokyčius ir sutrumpinti temperatūros atkūrimo laiką
Pašildant terpę
Kai kurie tyrėjai yra įpratę iš anksto šilti ištisų terpių butelius 37 ° C vandens vonioje, kad prieš naudojimą jie būtų į šią temperatūrą. Taip pat galima pašildyti terpę inkubatoriuje, kuris naudojamas tik įkaitinimui, o ne ląstelių kultūrai, kur terpė gali pasiekti optimalią temperatūrą, netrikdydama ląstelių kultūrų kitame inkubatoriuje. Bet tai, kiek mes žinome, paprastai nėra prieinamos išlaidos.
Inkubatoriaus viduje
Kiek įmanoma atidarykite inkubatoriaus duris ir kuo greitai uždarykite. Venkite šaltų vietų, kurios sukuria temperatūros skirtumus inkubatoriuje. Palikite vietos tarp kolbų, kad oras galėtų cirkuliuoti. Lentynos inkubatoriaus viduje gali būti perforuotos. Tai leidžia geresnį šilumos pasiskirstymą, nes tai leidžia orui praeiti pro skylutes. Tačiau skylių buvimas gali sukelti ląstelių augimo skirtumus, nes tarp skylių ir skylių ir meta ploto yra temperatūros skirtumų. Dėl šių priežasčių, jei jūsų eksperimentams reikalingas labai tolygus ląstelių kultūros augimas, kultūros kolbas galite sudėti ant metalo atramų su mažesniais kontaktiniais paviršiais, kurie paprastai nėra būtini įprastinėje ląstelių kultūroje.
Ląstelių apdorojimo laiko sumažinimas
Norėdami sumažinti laiko išlaidas ląstelių gydymo procese, reikia
- ▶ Prieš pradėdami dirbti, sutvarkykite visas reikiamas medžiagas ir įrankius.
- ▶ Dirbkite greitai ir sklandžiai, iš anksto peržiūrėdami eksperimentinius metodus, kad jūsų operacijos būtų pasikartojančios ir automatizuotos.
- ▶ Sumažinkite skysčių kontaktą su aplinkos oru.
- ▶ Išlaikykite nuolatinę temperatūrą ląstelių kultūros laboratorijoje, kur dirbate.
Pašto laikas: 2012 m. Sausio-03 d