中文
Temperatūras izmaiņu ietekme uz šūnu kultūru
Temperatūra ir svarīgs parametrs šūnu kultūrā, jo tas ietekmē rezultātu reproducējamību. Temperatūras izmaiņām virs vai zem 37 ° C ir ļoti būtiska ietekme uz zīdītāju šūnu šūnu augšanas kinētiku, līdzīgi kā baktēriju šūnās. Izmaiņas gēnu ekspresijā un modifikācijas šūnu struktūrā, šūnu cikla progresēšanā, mRNS stabilitāti var noteikt zīdītāju šūnās pēc vienas stundas 32ºC. Papildus tam, ka tieši ietekmē šūnu augšanu, temperatūras izmaiņas ietekmē arī barotnes pH, jo CO2 šķīdība maina pH (pH palielinās zemākā temperatūrā). Kultivētās zīdītāju šūnas var panest ievērojamu temperatūras pazemināšanos. Tos vairākas dienas var uzglabāt 4 ° C temperatūrā un var paciest sasalšanu līdz -196 ° C (izmantojot atbilstošus apstākļus). Tomēr viņi nevar paciest temperatūru virs aptuveni 2 ° C virs normālas vairāk nekā dažas stundas un ātri mirs 40 ° C temperatūrā un vairāk. Lai nodrošinātu maksimālu rezultātu reproducējamību, pat ja šūnas izdzīvo, ir jāuzmanās, lai saglabātu temperatūru pēc iespējas nemainīgāku šūnu inkubācijas un apstrādes laikā ārpus inkubatora.
Temperatūras variāciju iemesli inkubatorā
Jūs būsiet pamanījis, ka, atverot inkubatora durvis, temperatūra strauji pazeminās līdz iestatītajai vērtībai 37 ° C. Parasti temperatūra atgūsies dažu minūšu laikā pēc durvju aizvēršanas. Faktiski statiskajām kultūrām ir nepieciešams laiks, lai atgūtu līdz noteiktajai temperatūrai inkubatorā. Vairāki faktori var ietekmēt laiku, kas nepieciešams šūnu kultūrai, lai atgūtu temperatūru pēc ārstēšanas ārpus inkubatora. Šie faktori ietver ：
- ▶ Laika ilgums, kad šūnas ir bijušas ārpus inkubatora
- ▶ Kolbas veids, kurā šūnas audzē (ģeometrija ietekmē siltuma pārnesi)
- ▶ Inkubatorā konteineru skaits.
- ▶ Tiešs kolbu kontakts ar tērauda plauktu ietekmē siltuma apmaiņu un optimālās temperatūras sasniegšanas ātrumu, tāpēc labāk ir izvairīties no kolbu kaudzēm un novietot katru trauku
- ▶ tieši inkubatora plauktā.
Jebkura svaigu konteineru un izmantoto barotņu sākotnējā temperatūra ietekmēs arī laiku, kas nepieciešams, lai šūnas būtu optimālajā stāvoklī; Jo zemāka to temperatūra, jo ilgāk tā prasa.
Ja visi šie faktori laika gaitā mainās, tie arī palielinās mainīgumu starp eksperimentiem. Ir jāsamazina šīs temperatūras svārstības, pat ja ne vienmēr ir iespējams visu kontrolēt (īpaši, ja vairāki cilvēki izmanto vienu un to pašu inkubatoru).
Kā samazināt temperatūras izmaiņas un samazināt temperatūras atjaunošanās laiku
Veicot barotni
Daži pētnieki ir pieraduši pirms sildīt veselas barotnes 37 ° C ūdens vannā, lai pirms lietošanas tās sasniegtu. Ir arī iespējams uzkarsēt barotni inkubatorā, ko izmanto tikai barotnei, nevis šūnu kultūrai, kur barotne var sasniegt optimālu temperatūru, netraucējot šūnu kultūras citā inkubatorā. Bet tas, cik mēs zinām, parasti nav pieejami izdevumi.
Inkubatora iekšpusē
Pēc iespējas mazāk atveriet inkubatora durvis un pēc iespējas ātrāk aizveriet tās. Izvairieties no aukstiem plankumiem, kas rada temperatūras atšķirības inkubatorā. Atstājiet vietu starp kolbām, lai gaiss varētu cirkulēt. Inkubatora iekšpusē var perforēt plauktus. Tas ļauj labāk sadalīt siltumu, jo tas ļauj gaisam iziet cauri caurumiem. Tomēr caurumu klātbūtne var izraisīt šūnu augšanas atšķirības, jo starp laukumu ar caurumiem un ar meta laukumu pastāv temperatūras starpība. Šo iemeslu dēļ, ja jūsu eksperimentiem ir nepieciešama ļoti vienmērīga šūnu kultūras augšana, jūs varat novietot kultūras kolbas uz metāla balstiem ar mazākām kontakta virsmām, kuras parasti nav vajadzīgas ikdienas šūnu kultūrā.
Šūnu apstrādes laika samazināšana
Lai samazinātu laiku, ko pavada šūnu ārstēšanas procesā, jums tas ir jādara
- ▶ pirms darba sākšanas sakārtojiet visus nepieciešamos materiālus un rīkus.
- ▶ Darbs ātri un vienmērīgi, iepriekš pārskatot eksperimentālās metodes, lai jūsu darbība tiktu atkārtota un automatizēta.
- ▶ Samaziniet šķidrumu kontaktu ar apkārtējo gaisu.
- ▶ Uzturiet nemainīgu temperatūru šūnu kultūras laboratorijā, kur strādājat.
Pasta laiks: janvāris-03-244