中文
Effekt av temperaturvariasjon på cellekultur
Temperatur er en viktig parameter i cellekultur fordi den påvirker reproduserbarheten av resultatene. Temperaturendringer over eller under 37 ° C har en veldig betydelig effekt på cellevekstkinetikken til pattedyrceller, lik den for bakterieceller. Endringer i genuttrykk og modifikasjoner i cellulær struktur, cellesyklusprogresjon, mRNA -stabilitet kan påvises i pattedyrceller etter en time ved 32 ºC. I tillegg til direkte å påvirke celleveksten, påvirker endringer i temperatur også pH i media, da løseligheten av CO2 endrer pH (pH øker ved lavere temperaturer). Dyrkede pattedyrceller tåler signifikante temperaturer. De kan lagres ved 4 ° C i flere dager og tåler frysing til -196 ° C (ved bruk av passende forhold). Imidlertid tåler de ikke temperaturer over ca. 2 ° C over normalt i mer enn noen få timer og vil dø raskt ved 40 ° C og over. For å sikre maksimal reproduserbarhet av resultatene, selv om cellene overlever, må det tas forsiktighet for å opprettholde temperaturen så konstant som mulig under inkubasjon og håndtering av cellene utenfor inkubatoren.
Årsakene til temperaturvariasjoner inne i inkubatoren
Du vil ha lagt merke til at når inkubatordøren åpnes, synker temperaturen raskt til den innstilte verdien på 37 ° C. Generelt sett vil temperaturen komme seg i løpet av få minutter etter at døren er lukket. Faktisk trenger statiske kulturer tid til å komme seg etter den innstilte temperaturen i inkubatoren. En rekke faktorer kan påvirke tiden det tar for en cellekultur å gjenvinne temperaturen etter behandling utenfor inkubatoren. Disse faktorene inkluderer ：
- ▶ Hvor lang tid cellene har vært ute av inkubatoren
- ▶ Type kolbe som cellene dyrkes i (geometri påvirker varmeoverføring)
- ▶ Antall containere i inkubatoren.
- ▶ Direkte kontakt med kolberne med stålhylle påvirker varmeutvekslingen og hastigheten på å nå den optimale temperaturen, så det er bedre å unngå stabler med kolber og å plassere hvert fartøy
- ▶ direkte på hyllen på inkubatoren.
Den opprinnelige temperaturen for eventuelle friske containere og medier som brukes vil også påvirke tiden det tar for cellene å være i sin optimale tilstand; Jo lavere temperatur, jo lenger tar det.
Hvis alle disse faktorene endres over tid, vil de også øke variasjonen mellom eksperimenter. Det er nødvendig å minimere disse temperatursvingningene, selv om det ikke alltid er mulig å kontrollere alt (spesielt hvis flere bruker samme inkubator).
Hvordan minimere temperaturvariasjoner og redusere gjenvinningstiden for temperaturen
Ved å forvarme mediet
Noen forskere er vant til å forhåndsoppvarme hele flasker med medier i et vannbad på 37 ° C for å bringe dem til denne temperaturen før bruk. Det er også mulig å forvarme mediet i en inkubator som bare brukes til medium forvarming og ikke for cellekultur, der mediet kan nå en optimal temperatur uten å forstyrre cellekulturene i en annen inkubator. Men dette, så vidt vi vet, er vanligvis ikke en rimelig kostnad.
Inne i inkubatoren
Åpne inkubatordøren så lite som mulig og lukk den så raskt. Unngå kalde flekker, som skaper temperaturforskjeller i inkubatoren. La plass mellom kolberne for å la luft sirkulere. Hyllene inne i inkubatoren kan være perforert. Dette gir bedre varmefordeling da den lar luft passere gjennom hullene. Tilstedeværelsen av hull kan imidlertid føre til forskjeller i cellevekst, fordi det er en temperaturforskjell mellom området med hull og området med meta. Av disse grunner, hvis eksperimentene dine krever svært ensartet vekst av cellekulturen, kan du plassere kulturkolber på metallstøtter med mindre kontaktflater, som vanligvis ikke er nødvendige i rutinemessig cellekultur.
Minimere cellebehandlingstid
For å minimere tidsbruk i cellebehandlingsprosessen, må du
- ▶ Organiser alt nødvendig materiale og verktøy før du begynner å jobbe.
- ▶ Arbeid raskt og jevnt, gjennomgå eksperimentelle metoder på forhånd slik at operasjonene dine blir repeterende og automatisert.
- ▶ Minimer kontakt med væsker med omgivelsesluft.
- ▶ Oppretthold en konstant temperatur i cellekulturlaboratoriet der du jobber.
Post Time: Jan-03-2024