中文
Efeito da variação de temperatura na cultura de células
A temperatura é um parâmetro importante na cultura de células porque afeta a reprodutibilidade dos resultados. As mudanças de temperatura acima ou abaixo de 37 ° C têm um efeito muito significativo na cinética de crescimento celular das células de mamíferos, semelhante à das células bacterianas. Alterações na expressão gênica e modificações na estrutura celular, progressão do ciclo celular, estabilidade do mRNA pode ser detectada em células de mamíferos após uma hora a 32ºC. Além de afetar diretamente o crescimento celular, as mudanças de temperatura também afetam o pH do meio, pois a solubilidade do CO2 altera o pH (o pH aumenta em temperaturas mais baixas). As células de mamíferos cultivadas podem tolerar a temperatura significativa. Eles podem ser armazenados a 4 ° C por vários dias e podem tolerar congelamento a -196 ° C (usando condições apropriadas). No entanto, eles não podem tolerar temperaturas acima de 2 ° C acima do normal por mais de algumas horas e morrem rapidamente a 40 ° C e acima. Para garantir a máxima reprodutibilidade dos resultados, mesmo que as células sobrevivam, é necessário tomar cuidado para manter a temperatura o mais constante possível durante a incubação e manuseio das células fora da incubadora.
Razões para variações de temperatura dentro da incubadora
Você terá notado que, quando a porta da incubadora for aberta, a temperatura cai rapidamente para o valor definido de 37 ° C. Em geral, a temperatura se recuperará alguns minutos depois que a porta é fechada. De fato, as culturas estáticas precisam de tempo para se recuperar para a temperatura definida na incubadora. Vários fatores podem afetar o tempo necessário para uma cultura de células recuperar a temperatura após o tratamento fora da incubadora. Esses fatores incluem:
- ▶ O período de tempo em que as células foram fora da incubadora
- ▶ O tipo de balão no qual as células são cultivadas (a geometria afeta a transferência de calor)
- ▶ Número de recipientes na incubadora.
- ▶ O contato direto dos frascos com a prateleira de aço afeta a troca de calor e a velocidade de atingir a temperatura ideal; portanto, é melhor evitar pilhas de frascos e colocar cada navio
- ▶ diretamente na prateleira da incubadora.
A temperatura inicial de quaisquer recipientes novos e meios utilizados também afetará o tempo necessário para que as células estejam em seu estado ideal; Quanto menor a temperatura, mais tempo leva.
Se todos esses fatores mudarem ao longo do tempo, eles também aumentarão a variabilidade entre os experimentos. É necessário minimizar essas flutuações de temperatura, mesmo que nem sempre seja possível controlar tudo (especialmente se várias pessoas estiverem usando a mesma incubadora).
Como minimizar as variações de temperatura e reduzir o tempo de recuperação da temperatura
Ao pré -aquecer o meio
Alguns pesquisadores estão acostumados a pré-aquecer garrafas inteiras de mídia em um banho de água de 37 ° C para levá-los a essa temperatura antes do uso. Também é possível pré -aquecer o meio em uma incubadora que é usada apenas para pré -aquecimento médio e não para a cultura de células, onde o meio pode atingir uma temperatura ideal sem perturbar as culturas celulares em outra incubadora. Mas isso, até onde sabemos, geralmente não é uma despesa acessível.
Dentro da incubadora
Abra a porta da incubadora o mínimo possível e feche -a o mais rápido possível. Evite pontos frios, que criam diferenças de temperatura na incubadora. Deixe o espaço entre os frascos para permitir que o ar circule. As prateleiras dentro da incubadora podem ser perfuradas. Isso permite uma melhor distribuição de calor, pois permite que o ar passe pelos orifícios. No entanto, a presença de orifícios pode levar a diferenças no crescimento celular, porque há uma diferença de temperatura entre a área com os orifícios e a área com meta. Por esses motivos, se seus experimentos exigirem um crescimento altamente uniforme da cultura de células, você poderá colocar os frascos de cultura em suportes de metal com superfícies de contato menores, que geralmente não são necessárias na cultura de células de rotina.
Minimizando o tempo de processamento de células
Para minimizar o tempo gasto no processo de tratamento celular, você precisa
- ▶ Organize todos os materiais e ferramentas necessários antes de começar a trabalhar.
- ▶ Trabalhe de maneira rápida e suave, revisando os métodos experimentais com antecedência para que suas operações se tornem repetitivas e automatizadas.
- ▶ Minimize o contato de líquidos com ar ambiente.
- ▶ Mantenha uma temperatura constante no laboratório de cultura de células onde você trabalha.
Hora de postagem: Jan-03-2024