中文
Efectul variației temperaturii asupra culturii celulare
Temperatura este un parametru important în cultura celulară, deoarece afectează reproductibilitatea rezultatelor. Modificările de temperatură peste sau sub 37 ° C au un efect foarte semnificativ asupra cineticii de creștere a celulelor celulelor mamifere, similar cu cel al celulelor bacteriene. Modificări ale expresiei genice și modificări în structura celulară, progresia ciclului celular, stabilitatea mRNA poate fi detectată în celulele mamiferelor după o oră la 32ºC. În plus față de afectarea directă a creșterii celulelor, modificările temperaturii afectează și pH -ul mediului, deoarece solubilitatea CO2 modifică pH -ul (pH -ul crește la temperaturi mai scăzute). Celulele de mamifere cultivate pot tolera scăderea semnificativă a temperaturii. Pot fi depozitate la 4 ° C timp de câteva zile și pot tolera înghețarea la -196 ° C (folosind condiții adecvate). Cu toate acestea, ele nu pot tolera temperaturile peste aproximativ 2 ° C peste normal mai mult de câteva ore și vor muri rapid la 40 ° C și mai mult. Pentru a asigura reproductibilitatea maximă a rezultatelor, chiar dacă celulele supraviețuiesc, trebuie să se acorde grijă pentru a menține temperatura cât mai constantă în timpul incubării și manipulării celulelor din afara incubatorului.
Motivele pentru variațiile de temperatură în interiorul incubatorului
Veți fi observat că atunci când este deschisă ușa incubatorului, temperatura scade rapid la valoarea setată de 37 ° C. În general, temperatura se va recupera în câteva minute după ce ușa este închisă. De fapt, culturile statice au nevoie de timp pentru a se recupera la temperatura stabilită în incubator. O serie de factori pot afecta timpul necesar pentru ca o cultură celulară să -și recapete temperatura după tratament în afara incubatorului. Acești factori includ ：
- ▶ Durata timpului în care celulele au ieșit din incubator
- ▶ Tipul de balon în care celulele sunt cultivate (geometria afectează transferul de căldură)
- ▶ Numărul de containere din incubator.
- ▶ Contactul direct al baloanelor cu raft
- ▶ direct pe raftul incubatorului.
Temperatura inițială a oricăror containere proaspete și medii utilizate va afecta, de asemenea, timpul necesar pentru ca celulele să fie în starea lor optimă; Cu cât temperatura lor este mai mică, cu atât este mai lungă.
Dacă toți acești factori se schimbă în timp, aceștia vor crește, de asemenea, variabilitatea dintre experimente. Este necesar să se minimizeze aceste fluctuații de temperatură, chiar dacă nu este întotdeauna posibil să controlăm totul (mai ales dacă mai multe persoane folosesc același incubator).
Cum să minimizezi variațiile de temperatură și să reduci timpul de recuperare a temperaturii
Prin preîncălzirea mediului
Unii cercetători sunt obișnuiți cu prelungirea sticlelor întregi de medii într-o baie de apă de 37 ° C pentru a le aduce la această temperatură înainte de utilizare. De asemenea, este posibil să preîncălziți mediul într -un incubator care este utilizat doar pentru preîncălzire medie și nu pentru cultura celulară, unde mediul poate atinge o temperatură optimă fără a deranja culturile celulare dintr -un alt incubator. Dar acest lucru, din câte știm, nu este de obicei o cheltuială accesibilă.
În interiorul incubatorului
Deschideți ușa incubatorului cât mai puțin și închideți -o cât mai repede. Evitați petele reci, care creează diferențe de temperatură în incubator. Lăsați spațiu între baloane pentru a permite circulația aerului. Rafturile din interiorul incubatorului pot fi perforate. Aceasta permite o mai bună distribuție a căldurii, deoarece permite trecerea aerului prin găuri. Cu toate acestea, prezența găurilor poate duce la diferențe de creștere a celulelor, deoarece există o diferență de temperatură între zona cu găuri și zona cu meta. Din aceste motive, dacă experimentele dvs. necesită o creștere extrem de uniformă a culturii celulare, puteți plasa baloanele de cultură pe suporturi metalice cu suprafețe de contact mai mici, care de obicei nu sunt necesare în cultura celulelor de rutină.
Minimizarea timpului de procesare a celulelor
Pentru a minimiza timpul petrecut în procesul de tratament celular, trebuie să
- ▶ Organizați toate materialele și instrumentele necesare înainte de a începe să lucrați.
- ▶ Lucrați rapid și fără probleme, revizuind în avans metodele experimentale, astfel încât operațiunile dvs. să devină repetitive și automatizate.
- ▶ Minimizarea contactului de lichide cu aerul ambiant.
- ▶ Mențineți o temperatură constantă în laboratorul de cultură celulară unde lucrați.
Timpul post: 03-2024 ianuarie