中文
Влияние изменения температуры на клеточную культуру
Температура является важным параметром в клеточной культуре, поскольку она влияет на воспроизводимость результатов. Изменения температуры выше или ниже 37 ° C оказывают очень значительное влияние на кинетику роста клеток клеток млекопитающих, аналогичные бактериальным клеткам. Изменения в экспрессии и модификациях генов в клеточной структуре, прогрессировании клеточного цикла, стабильности мРНК могут быть обнаружены в клетках млекопитающих через один час при 32ºC. В дополнение к непосредственному воздействию роста клеток, изменения в температуре также влияют на рН среды, поскольку растворимость CO2 изменяет pH (рН увеличивается при более низких температурах). Культируемые клетки млекопитающих могут переносить значительное снижение температуры. Они могут храниться при 4 ° C в течение нескольких дней и могут переносить замерзание до -196 ° C (с использованием соответствующих условий). Тем не менее, они не могут переносить температуру выше примерно на 2 ° C выше нормы в течение более нескольких часов и умрут быстро при 40 ° C и выше. Чтобы обеспечить максимальную воспроизводимость результатов, даже если клетки выживают, необходимо соблюдать осторожность, чтобы поддерживать максимально постоянную температуру во время инкубации и обработки клеток вне инкубатора.
Причины изменения температуры внутри инкубатора
Вы заметите, что когда дверь инкубатора будет открыта, температура быстро падает до установленного значения 37 ° C. В общем, температура будет восстанавливаться в течение нескольких минут после закрытия двери. На самом деле, статическим культурам нужно время для восстановления до установленной температуры в инкубаторе. Ряд факторов может повлиять на время, необходимое для того, чтобы клеточная культура восстановила температуру после обработки вне инкубатора. Эти факторы включают в себя:
- ▶ продолжительность времени, в течение которых ячейки были вне инкубатора
- ▶ Тип колбы, в которой ячейки выращивают (геометрия влияет на теплопередачу)
- ▶ Количество контейнеров в инкубаторе.
- ▶ Прямой контакт колб со стальной полкой влияет на теплообмен и скорость достижения оптимальной температуры, поэтому лучше избегать стеков колб и разместить каждый сосуд
- ▶ Прямо на полке инкубатора.
Начальная температура любых свежих контейнеров и используемых средств массовой информации также повлияет на время, необходимое для того, чтобы ячейки были в их оптимальном состоянии; Чем ниже их температура, тем дольше это требуется.
Если все эти факторы изменятся со временем, они также увеличат изменчивость между экспериментами. Необходимо минимизировать эти температурные колебания, даже если не всегда возможно контролировать все (особенно если несколько человек используют один и тот же инкубатор).
Как минимизировать изменения температуры и сократить время восстановления температуры
Предварительно нагреть среду
Некоторые исследователи привыкли к предварительному нагреванию целых бутылок среды в водяной бане 37 ° C, чтобы довести их до этой температуры перед использованием. Также можно предварительно разогреть среду в инкубаторе, который используется только для предварительного нагрева среды, а не для клеточной культуры, где среда может достигать оптимальной температуры, не нарушая клеточные культуры в другом инкубаторе. Но это, насколько нам известно, обычно не является доступным расходом.
Внутри инкубатора
Откройте дверь инкубатора как можно меньше и закройте ее как можно быстрее. Избегайте холодных пятен, которые создают температурные различия в инкубаторе. Оставьте пространство между колбами, чтобы воздух циркулировать. Полки внутри инкубатора могут быть перфорированы. Это позволяет лучше распределять тепло, поскольку позволяет воздуху проходить через отверстия. Тем не менее, наличие отверстий может привести к различиям в росте клеток, потому что существует разница температур между площадью с отверстиями и площадью с мета. По этим причинам, если ваши эксперименты требуют очень равномерного роста клеточной культуры, вы можете поместить культурные колбы на металлических опорах с меньшими контактными поверхностями, которые обычно не требуются в обычной клеточной культуре.
Минимизация времени обработки клеток
Чтобы свести к минимуму потраченное время в процессе лечения клеток, вам нужно
- ▶ Организуйте все необходимые материалы и инструменты, прежде чем начать работать.
- ▶ Работайте быстро и плавно, заранее просматривая экспериментальные методы, чтобы ваши операции стали повторяющимися и автоматизированными.
- ▶ Минимизируйте контакт жидкостей с окружающим воздухом.
- ▶ Поддерживайте постоянную температуру в лаборатории клеточной культуры, где вы работаете.
Время сообщения: январь-03-2024