中文
Vpliv temperaturne razlike na celično kulturo
Temperatura je pomemben parameter v celični kulturi, saj vpliva na obnovljivost rezultatov. Temperaturne spremembe nad ali pod 37 ° C imajo zelo pomemben vpliv na kinetiko rasti celic celic sesalcev, podobno kot pri bakterijskih celicah. Spremembe genske ekspresije in spreminjanja v celični strukturi, napredovanju celičnega cikla, stabilnosti mRNA lahko v celicah sesalcev odkrijemo po eni uri pri 32 ° C. Poleg neposrednega vpliva na rast celic spremembe temperature vplivajo tudi na pH medija, saj topnost CO2 spremeni pH (pH se poveča pri nižjih temperaturah). Gojene celice sesalcev lahko prenašajo znatno znižanje temperature. Shranjujte jih lahko pri 4 ° C več dni in lahko prenašajo zmrzovanje na -196 ° C (z uporabo ustreznih pogojev). Vendar ne morejo prenašati temperature nad približno 2 ° C nad normalno več kot nekaj ur in bodo hitro umrli pri 40 ° C in več. Da bi zagotovili največjo obnovljivost rezultatov, tudi če celice preživijo, je treba paziti, da se temperatura ohranja čim bolj konstantna med inkubacijo in ravnanjem s celicami zunaj inkubatorja.
Razlogi za temperaturne spremembe znotraj inkubatorja
Opazili boste, da se temperatura, ko se odprejo vrata inkubatorja, hitro spusti na nastavljeno vrednost 37 ° C. Na splošno se bo temperatura okrevala v nekaj minutah po zaprtju vrat. Pravzaprav statične kulture potrebujejo čas, da se v inkubatorju povrnejo nastavljena temperatura. Številni dejavniki lahko vplivajo
- ▶ Dolžina časa, ko so bile celice zunaj inkubatorja
- ▶ Vrsta bučke, v kateri se gojijo celice (geometrija vpliva na prenos toplote)
- ▶ Število zabojnikov v inkubatorju.
- ▶ Neposredni stik bučk z jekleno polico vpliva
- ▶ Neposredno na polici inkubatorja.
Začetna temperatura vseh svežih zabojnikov in uporabljenih medijev bo vplivala tudi na čas, ki je potreben, da so celice v njihovem optimalnem stanju; Nižja kot njihova temperatura, dlje traja.
Če se vsi ti dejavniki sčasoma spreminjajo, bodo tudi povečali spremenljivost med poskusi. Treba je zmanjšati ta temperaturna nihanja, tudi če ni vedno mogoče nadzorovati vsega (še posebej, če več ljudi uporablja isti inkubator).
Kako zmanjšati temperaturne spremembe in skrajšati čas obnovitve temperature
S predhodno segrevanjem medija
Nekateri raziskovalci so navajeni, da v vodni kopeli 37 ° C predhodno ogrejejo cele steklenice medijev, da jih pred uporabo pripeljejo do te temperature. Možno je tudi predgreti medij v inkubatorju, ki se uporablja samo za srednje predgrevanje in ne za celično kulturo, kjer lahko medij doseže optimalno temperaturo, ne da bi motil celične kulture v drugem inkubatorju. Toda to, kolikor vemo, običajno ni cenovno ugoden strošek.
Znotraj inkubatorja
Odprite vrata inkubatorja čim manj in jo čim hitreje zaprite. Izogibajte se hladnim točkam, ki ustvarjajo temperaturne razlike v inkubatorju. Med bučkami pustite prostor, da lahko kroži zrak. Police znotraj inkubatorja je mogoče perforirati. To omogoča boljšo porazdelitev toplote, saj omogoča, da zrak prehaja skozi luknje. Vendar lahko prisotnost lukenj privede do razlik v rasti celic, saj obstaja temperaturna razlika med območjem z luknjami in območjem z Meta. Zaradi tega, če vaši poskusi zahtevajo zelo enakomerno rast celične kulture, lahko kulturne bučke postavite na kovinske nosilce z manjšimi kontaktnimi površinami, ki v rutinski celični kulturi običajno niso potrebne.
Zmanjšanje časa obdelave celic
Če želite zmanjšati čas porabe v procesu zdravljenja celic
- ▶ Organizirajte vse potrebne materiale in orodja, preden začnete delati.
- ▶ Delajte hitro in gladko, vnaprej pregledujte eksperimentalne metode, tako da bodo vaše delovanje postale ponavljajoče in avtomatizirane.
- ▶ Zmanjšajte stik tekočin z zunanjim zrakom.
- ▶ Vzdrževanje konstantne temperature v laboratoriju za celično kulturo, kjer delate.
Čas objave: januar-03-2024