中文
Ефекат температурне варијације на ћелијску културу
Температура је важан параметар у ћелијској култури јер утиче на репродуктивност резултата. Промене температуре изнад или испод 37 ° Ц имају веома значајан утицај на кинетику раста ћелија ћелија сисара, слично оној бактеријске ћелије. Промјене у генском изразу и модификацијама у ћелијској структури, напредовање ћелијског циклуса, стабилност мРНА могу се открити у ћелијама сисара након једног сата на 32 ° Ц. Поред директног утицаја на раст ћелије, промене температуре такође утичу и на пХ медија, јер растворљивост ЦО2 мења пХ (пХ повећава на нижим температурама). Култивиране ћелије сисара могу толерисати значајну температуру опадају. Они се могу чувати на 4 ° Ц неколико дана и могу толерисати смрзавање на -196 ° Ц (користећи одговарајуће услове). Међутим, они не могу да толеришу температуре изнад 2 ° Ц изнад Нормал-а дуже од неколико сати и умреће брзо на 40 ° Ц и више. Да би се осигурала максимална репродуктивност резултата, чак и ако ћелије преживе, потребно је да се одваја да се температура одржи као константну током инкубације и руковања ћелијама изван инкубатора.
Разлози за температурне варијације унутар инкубатора
Приметићете да када се отвори врата инкубатора, температура брзо пада на постављену вредност од 37 ° Ц. Генерално, температура ће се опоравити у року од неколико минута након затварања врата. У ствари, статичке културе је потребно време да се опорави на постављеној температури у инкубатору. Бројни фактори могу утицати на време које је потребно да ћелијска култура поврати температуру након третмана изван инкубатора. Ове фактори укључују:
- ▶ Дужина времена ћелије су нестале из инкубатора
- ▶ врста тиквице у којој ће ћелије узгајати (геометрија утиче на пренос топлоте)
- ▶ Број контејнера у инкубатору.
- ▶ Директан контакт тиквика са челичном полком утиче на размену топлоте и брзину достизања оптималне температуре, тако да је боље избећи хрпе тиквице и поставити сваку посуду
- ▶ директно на полици инкубатора.
Почетна температура свих свежих контејнера и коришћених медија такође ће утицати на време које је потребно да ћелије буду у њиховом оптималном стању; Спуштање температуре, што је потребно дуже.
Ако се сви ови фактори током времена мењају, они ће такође повећати променљивост између експеримената. Потребно је да се умањи ове флуктуације температуре, чак и ако није увек могуће контролисати све (посебно ако неколико људи користи исти инкубатор).
Како минимизирати варијације температуре и смањити време опоравка температуре
Претресањем медија
Неки истраживачи су навикли да се претходно загревају читаве боце медија у воденој купељи од 37 ° Ц да их доведу на ову температуру пре употребе. Такође је могуће прегрејати медијум у инкубатору који се користи само за средње предгревање и не за ћелијску културу, где медијум може достићи оптималну температуру без ометања ћелијских култура у другом инкубатору. Али то, колико знамо, обично није приступачан трошак.
Унутар инкубатора
Отворите врата инкубатора што је мање могуће и затварање је брзо. Избегавајте хладне мрље, које стварају температурне разлике у инкубатору. Оставите простор између тиквице како би се омогућило да ваздух циркулише. Полице унутар инкубатора могу се перфорирати. То омогућава бољу дистрибуцију топлоте јер омогућава ваздух да прође кроз рупе. Међутим, присуство рупа може довести до разлика у расту ћелија, јер постоји температурна разлика између подручја са рупама и подручја са Мета. Из тих разлога, ако ваши експерименти захтевају веома јединствени раст ћелијске културе, можете поставити босе за културу на носаче метала са мањим контактним површинама, које обично нису потребне у рутинској ћелијској култури.
Минимизирање времена обраде ћелија
Да бисте умањили време проводе у процесу лечења ћелија, то морате
- ▶ Организујте све потребне материјале и алате пре него што почнете да радите.
- ▶ Радите брзо и несметано, преиспитујући експерименталне методе унапред тако да ваше пословање постају понављају и аутоматизоване.
- ▶ Смањите контакт течности са амбијенталним ваздухом.
- ▶ Одржавајте константну температуру у лабораторији ћелијске културе у којој радите.
Вријеме поште: Јан-03-2024