中文
ผลของการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิต่อการเพาะเลี้ยงเซลล์
อุณหภูมิเป็นพารามิเตอร์ที่สำคัญในการเพาะเลี้ยงเซลล์เนื่องจากมีผลต่อการทำซ้ำของผลลัพธ์ การเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิสูงกว่าหรือต่ำกว่า 37 ° C มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญอย่างมากต่อจลนพลศาสตร์การเจริญเติบโตของเซลล์ของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมซึ่งคล้ายกับเซลล์แบคทีเรีย การเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของยีนและการดัดแปลงในโครงสร้างเซลล์ความก้าวหน้าของวัฏจักรของเซลล์ความเสถียรของ mRNA สามารถตรวจพบในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลังจากหนึ่งชั่วโมงที่32ºC นอกเหนือจากการส่งผลโดยตรงต่อการเจริญเติบโตของเซลล์แล้วการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิยังส่งผลกระทบต่อค่า pH ของสื่อเนื่องจากความสามารถในการละลายของ CO2 จะเปลี่ยนแปลงค่า pH (ค่า pH เพิ่มขึ้นที่อุณหภูมิที่ต่ำกว่า) เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เพาะเลี้ยงสามารถทนต่ออุณหภูมิที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ สามารถเก็บไว้ที่ 4 ° C เป็นเวลาหลายวันและสามารถทนต่อการแช่แข็งได้ถึง -196 ° C (ใช้เงื่อนไขที่เหมาะสม) อย่างไรก็ตามพวกเขาไม่สามารถทนต่ออุณหภูมิสูงกว่าประมาณ 2 ° C สูงกว่าปกตินานกว่าสองสามชั่วโมงและจะตายอย่างรวดเร็วที่ 40 ° C ขึ้นไป เพื่อให้แน่ใจว่าการทำซ้ำสูงสุดของผลลัพธ์แม้ว่าเซลล์จะอยู่รอดได้จำเป็นต้องมีการดูแลเพื่อรักษาอุณหภูมิให้คงที่เท่าที่จะทำได้ในระหว่างการฟักตัวและการจัดการเซลล์นอกศูนย์บ่มเพาะ
เหตุผลสำหรับการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิภายในศูนย์บ่มเพาะ
คุณจะสังเกตเห็นว่าเมื่อเปิดประตูศูนย์บ่มเพาะอุณหภูมิจะลดลงอย่างรวดเร็วถึงค่าที่กำหนดไว้ที่ 37 ° C โดยทั่วไปอุณหภูมิจะฟื้นตัวภายในไม่กี่นาทีหลังจากปิดประตู ในความเป็นจริงวัฒนธรรมคงที่ต้องใช้เวลาในการกู้คืนอุณหภูมิที่ตั้งไว้ในตู้อบ ปัจจัยหลายประการอาจส่งผลกระทบต่อเวลาที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อฟื้นอุณหภูมิหลังการรักษานอกศูนย์บ่มเพาะปัจจัยเหล่านี้รวมถึง：：
- ▶ระยะเวลาที่เซลล์ออกจากศูนย์บ่มเพาะ
- ▶ชนิดของขวดที่เซลล์ปลูก (เรขาคณิตมีผลต่อการถ่ายเทความร้อน)
- ▶จำนวนคอนเทนเนอร์ในศูนย์บ่มเพาะ
- ▶การสัมผัสโดยตรงของขวดกับชั้นวางเหล็กส่งผลกระทบต่อการแลกเปลี่ยนความร้อนและความเร็วในการเข้าถึงอุณหภูมิที่เหมาะสมดังนั้นจึงเป็นการดีกว่าที่จะหลีกเลี่ยงกองขวดและวางเรือแต่ละลำ
- ▶โดยตรงบนชั้นวางของศูนย์บ่มเพาะ
อุณหภูมิเริ่มต้นของภาชนะบรรจุสดและสื่อที่ใช้จะส่งผลกระทบต่อเวลาที่เซลล์จะอยู่ในสถานะที่เหมาะสมที่สุด ยิ่งอุณหภูมิต่ำลงเท่าไหร่ก็ยิ่งใช้เวลานานขึ้นเท่านั้น
หากปัจจัยทั้งหมดเหล่านี้เปลี่ยนแปลงไปตามกาลเวลาพวกเขาจะเพิ่มความแปรปรวนระหว่างการทดลอง มีความจำเป็นที่จะต้องลดความผันผวนของอุณหภูมิเหล่านี้ให้น้อยที่สุดแม้ว่าจะไม่สามารถควบคุมทุกสิ่งได้เสมอไป (โดยเฉพาะอย่างยิ่งหากหลายคนใช้ศูนย์บ่มเพาะเดียวกัน)
วิธีลดความแปรปรวนของอุณหภูมิและลดเวลาในการกู้คืนอุณหภูมิ
โดยการอุ่นสื่อกลาง
นักวิจัยบางคนคุ้นเคยกับการอุ่นขวดทั้งขวดในอ่างน้ำ 37 ° C เพื่อนำพวกเขาไปที่อุณหภูมินี้ก่อนการใช้งาน นอกจากนี้ยังเป็นไปได้ที่จะเปิดสื่อกลางในศูนย์บ่มเพาะที่ใช้สำหรับการอุ่นอาหารกลางและไม่ใช่สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ซึ่งสื่อสามารถเข้าถึงอุณหภูมิที่เหมาะสมโดยไม่รบกวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ในศูนย์บ่มเพาะอื่น แต่เท่าที่เรารู้มักจะไม่ใช่ค่าใช้จ่ายที่เหมาะสม
ภายในศูนย์บ่มเพาะ
เปิดประตูศูนย์บ่มเพาะให้น้อยที่สุดและปิดอย่างรวดเร็ว หลีกเลี่ยงจุดเย็นซึ่งสร้างความแตกต่างของอุณหภูมิในศูนย์บ่มเพาะ เว้นช่องว่างระหว่างขวดเพื่อให้อากาศไหลเวียน ชั้นวางภายในตู้อบสามารถเจาะรูได้ สิ่งนี้ช่วยให้การกระจายความร้อนดีขึ้นเนื่องจากช่วยให้อากาศผ่านรู อย่างไรก็ตามการปรากฏตัวของหลุมสามารถนำไปสู่ความแตกต่างของการเจริญเติบโตของเซลล์เนื่องจากมีความแตกต่างของอุณหภูมิระหว่างพื้นที่ที่มีรูและพื้นที่ที่มีเมตา ด้วยเหตุผลเหล่านี้หากการทดลองของคุณต้องการการเจริญเติบโตอย่างสม่ำเสมอของการเพาะเลี้ยงเซลล์คุณสามารถวางขวดวัฒนธรรมบนการรองรับโลหะด้วยพื้นผิวสัมผัสขนาดเล็กซึ่งมักไม่จำเป็นในการเพาะเลี้ยงเซลล์ตามปกติ
ลดเวลาในการประมวลผลเซลล์
เพื่อลดเวลาที่ใช้ในกระบวนการรักษาเซลล์คุณต้องลด
- ▶จัดระเบียบวัสดุและเครื่องมือที่จำเป็นทั้งหมดก่อนที่จะเริ่มทำงาน
- ▶ทำงานได้อย่างรวดเร็วและราบรื่นตรวจสอบวิธีการทดลองล่วงหน้าเพื่อให้การดำเนินการของคุณซ้ำซากและอัตโนมัติ
- ▶ลดการสัมผัสของเหลวด้วยอากาศโดยรอบ
- ▶รักษาอุณหภูมิคงที่ในห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่คุณทำงาน
เวลาโพสต์: ม.ค.-03-2024