中文
Ảnh hưởng của sự thay đổi nhiệt độ đến nuôi cấy tế bào
Nhiệt độ là một thông số quan trọng trong nuôi cấy tế bào vì nó ảnh hưởng đến khả năng tái tạo của kết quả. Thay đổi nhiệt độ trên hoặc dưới 37 ° C có ảnh hưởng rất đáng kể đến động học tăng trưởng tế bào của các tế bào động vật có vú, tương tự như các tế bào vi khuẩn. Thay đổi biểu hiện gen và sửa đổi trong cấu trúc tế bào, sự tiến triển của chu kỳ tế bào, sự ổn định mRNA có thể được phát hiện trong các tế bào động vật có vú sau một giờ ở 32ºC. Ngoài việc ảnh hưởng trực tiếp đến sự phát triển của tế bào, sự thay đổi nhiệt độ cũng ảnh hưởng đến độ pH của môi trường, vì độ hòa tan của CO2 làm thay đổi độ pH (pH tăng ở nhiệt độ thấp hơn). Các tế bào động vật có vú nuôi cấy có thể chịu được giảm nhiệt độ đáng kể. Chúng có thể được lưu trữ ở 4 ° C trong vài ngày và có thể chịu được đóng băng đến -196 ° C (sử dụng các điều kiện thích hợp). Tuy nhiên, chúng không thể chịu được nhiệt độ trên khoảng 2 ° C so với bình thường trong hơn một vài giờ và sẽ chết nhanh chóng ở 40 ° C trở lên. Để đảm bảo khả năng tái tạo tối đa của kết quả, ngay cả khi các tế bào tồn tại, cần phải cẩn thận để duy trì nhiệt độ không đổi nhất có thể trong quá trình ủ và xử lý các tế bào bên ngoài lò ấp.
Lý do cho sự thay đổi nhiệt độ bên trong lò ấp
Bạn sẽ nhận thấy rằng khi cửa ươm tạo được mở, nhiệt độ giảm nhanh xuống giá trị đã đặt là 37 ° C. Nói chung, nhiệt độ sẽ phục hồi trong vòng vài phút sau khi cửa được đóng lại. Trên thực tế, nuôi cấy tĩnh cần thời gian để phục hồi nhiệt độ đã đặt trong máy ấp trứng. Một số yếu tố có thể ảnh hưởng đến thời gian nuôi cấy tế bào để lấy lại nhiệt độ sau khi điều trị bên ngoài lò ấp.Những yếu tố này bao gồm ：
- ▶ Thời gian các tế bào đã ra khỏi máy ấp trứng
- ▶ Loại bình trong đó các tế bào được phát triển (hình học ảnh hưởng đến truyền nhiệt)
- ▶ Số lượng container trong vườn ươm.
- ▶ Tiếp xúc trực tiếp của các bình với kệ thép ảnh hưởng đến việc trao đổi nhiệt và tốc độ đạt đến nhiệt độ tối ưu, vì vậy tốt hơn là tránh các ngăn xếp của bình và đặt mỗi tàu
- ▶ Trực tiếp trên kệ của vườn ươm.
Nhiệt độ ban đầu của bất kỳ thùng chứa mới và phương tiện được sử dụng cũng sẽ ảnh hưởng đến thời gian để các tế bào ở trạng thái tối ưu của chúng; Nhiệt độ của chúng càng thấp, nó càng mất càng lâu.
Nếu tất cả các yếu tố này thay đổi theo thời gian, chúng cũng sẽ tăng sự thay đổi giữa các thí nghiệm. Cần phải giảm thiểu các biến động nhiệt độ này, ngay cả khi không phải lúc nào cũng có thể kiểm soát mọi thứ (đặc biệt là nếu một số người đang sử dụng cùng một máy ấp trứng).
Cách giảm thiểu biến đổi nhiệt độ và giảm thời gian phục hồi nhiệt độ
Bằng cách làm nóng trước phương tiện
Một số nhà nghiên cứu đã quen với việc làm ấm toàn bộ chai phương tiện trong bồn nước 37 ° C để đưa chúng đến nhiệt độ này trước khi sử dụng. Cũng có thể làm nóng môi trường trong một máy ấp trứng chỉ được sử dụng để làm nóng trung bình và không nuôi cấy tế bào, trong đó môi trường có thể đạt đến nhiệt độ tối ưu mà không làm xáo trộn nuôi cấy tế bào trong máy ấp trứng khác. Nhưng điều này, theo như chúng ta biết, thường không phải là một chi phí giá cả phải chăng.
Bên trong vườn ươm
Mở cửa ươm tạo càng ít càng tốt và đóng nó càng nhanh. Tránh các điểm lạnh, tạo ra sự khác biệt về nhiệt độ trong máy ấp trứng. Để lại khoảng trống giữa các bình để cho phép không khí lưu thông. Các kệ bên trong vườn ươm có thể được đục lỗ. Điều này cho phép phân phối nhiệt tốt hơn vì nó cho phép không khí đi qua các lỗ. Tuy nhiên, sự hiện diện của các lỗ có thể dẫn đến sự khác biệt về sự phát triển của tế bào, bởi vì có sự khác biệt về nhiệt độ giữa diện tích với các lỗ và diện tích với meta. Vì những lý do này, nếu các thí nghiệm của bạn yêu cầu sự tăng trưởng đồng đều cao của nuôi cấy tế bào, bạn có thể đặt các bình nuôi cấy trên các hỗ trợ kim loại với các bề mặt tiếp xúc nhỏ hơn, thường không cần thiết trong nuôi cấy tế bào thông thường.
Giảm thiểu thời gian xử lý tế bào
Để giảm thiểu thời gian dành cho quá trình điều trị tế bào, bạn cần
- ▶ Tổ chức tất cả các vật liệu và công cụ cần thiết trước khi bạn bắt đầu làm việc.
- ▶ Làm việc nhanh chóng và suôn sẻ, xem xét trước các phương pháp thử nghiệm để các hoạt động của bạn trở nên lặp đi lặp lại và tự động.
- ▶ Giảm thiểu tiếp xúc của chất lỏng với không khí xung quanh.
- ▶ Duy trì nhiệt độ không đổi trong phòng thí nghiệm nuôi cấy tế bào nơi bạn làm việc.
Thời gian đăng: Tháng 8-18-2023