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溫度變化對細胞培養的影響
溫度是細胞培養的重要參數，因為它會影響結果的可重複性。高於或低於37°C的溫度變化對哺乳動物細胞的細胞生長動力學具有非常明顯的影響，類似於細菌細胞的細胞。在32ºC下一小時後，可以在哺乳動物細胞中檢測到基因表達的變化和細胞結構，細胞週期進程，mRNA穩定性的變化。除了直接影響細胞生長外，溫度的變化還會影響培養基的pH值，因為二氧化碳的溶解度會改變pH（pH值在較低的溫度下增加）。培養的哺乳動物細胞可以忍受明顯的溫度降低。它們可以在4°C下儲存幾天，並且可以忍受-196°C（使用適當的條件）。但是，它們不能忍受高於正常水平約2°C以上的溫度超過幾個小時，並且會在40°C及以上迅速死亡。為了確保結果的最大可重複性，即使細胞存活，也需要注意在孵化器外部的孵育和處理過程中盡可能恆定的溫度。
孵化器內部溫度變化的原因
您會注意到，當孵化器門打開時，溫度迅速下降至37°C的設定值。通常，在門關閉後的幾分鐘內，溫度將在幾分鐘內恢復。實際上，靜態培養物需要時間來恢復到孵化器中的設定溫度。許多因素可能會影響細胞培養在孵化器外治療後溫度所需的時間。這些因素包括：
- ▶電池已經從孵化器中脫出的時間長度
- ▶細胞生長的燒瓶類型（幾何影響傳熱）
- ▶孵化器中的容器數量。
- ▶燒瓶與鋼架的直接接觸會影響熱交換和達到最佳溫度的速度，因此最好避免堆疊燒瓶並放置每個容器
- ▶直接在孵化器的架子上。
任何新鮮容器和使用的介質的初始溫度也會影響細胞處於最佳狀態所需的時間。其溫度越低，所需的時間就越長。
如果所有這些因素隨時間變化，它們還將增加實驗之間的變異性。即使不是總是可以控制所有事物（尤其是幾個人使用相同的孵化器），也有必要最大程度地減少這些溫度波動。
如何最大程度地減少溫度變化並減少溫度恢復時間
通過預熱介質
一些研究人員習慣於在37°C的水浴中預熱整瓶培養基，以使其在使用前將其提高到該溫度。也可以將僅用於培養基預熱而不用於細胞培養的培養基中的培養基預熱，在這種培養基中，培養基可以在不干擾另一個孵化器中細胞培養物的情況下達到最佳溫度。但據我們所知，這通常不是負擔得起的費用。
在孵化器內部
盡可能少地打開孵化器門，並儘快關閉。避免冷點，這會在孵化器中產生溫度差異。在燒瓶之間留出空間，以使空氣循環。孵化器內部的架子可以穿孔。這樣可以更好地分佈熱量，因為它允許空氣通過孔。但是，孔的存在可能導致細胞生長的差異，因為孔的區域與元區域之間存在溫度差。由於這些原因，如果您的實驗需要高度均勻的細胞培養生長，則可以將培養瓶放在具有較小接觸表面的金屬支撐上，這在常規細胞培養中通常不需要。
最小化細胞處理時間
為了最大程度地減少細胞處理過程的時間，您需要
- ▶在開始工作之前組織所有必要的材料和工具。
- ▶快速，平穩地工作，提前審查實驗方法，以使您的操作變得重複和自動化。
- ▶最大程度地減少液體與環境空氣的接觸。
- ▶在您工作的細胞培養實驗室中保持恆定的溫度。
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