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温度变化对细胞培养的影响
温度是细胞培养的重要参数，因为它会影响结果的可重复性。高于或低于37°C的温度变化对哺乳动物细胞的细胞生长动力学具有非常明显的影响，类似于细菌细胞的细胞。在32ºC下一小时后，可以在哺乳动物细胞中检测到基因表达的变化和细胞结构，细胞周期进程，mRNA稳定性的变化。除了直接影响细胞生长外，温度的变化还会影响培养基的pH值，因为二氧化碳的溶解度会改变pH（pH值在较低的温度下增加）。培养的哺乳动物细胞可以忍受明显的温度降低。它们可以在4°C下储存几天，并且可以忍受-196°C（使用适当的条件）。但是，它们不能忍受高于正常水平约2°C以上的温度超过几个小时，并且会在40°C及以上迅速死亡。为了确保结果的最大可重复性，即使细胞存活，也需要注意在孵化器外部的孵育和处理过程中尽可能恒定的温度。
孵化器内部温度变化的原因
您会注意到，当孵化器门打开时，温度迅速下降至37°C的设定值。通常，在门关闭后的几分钟内，温度将在几分钟内恢复。实际上，静态培养物需要时间来恢复到孵化器中的设定温度。许多因素可能会影响细胞培养在孵化器外治疗后温度所需的时间。这些因素包括：
- ▶电池已经从孵化器中脱出的时间长度
- ▶细胞生长的烧瓶类型（几何影响传热）
- ▶孵化器中的容器数量。
- ▶烧瓶与钢架的直接接触会影响热交换和达到最佳温度的速度，因此最好避免堆叠烧瓶并放置每个容器
- ▶直接在孵化器的架子上。
任何新鲜容器和使用的介质的初始温度也会影响细胞处于最佳状态所需的时间。其温度越低，所需的时间就越长。
如果所有这些因素随时间变化，它们还将增加实验之间的变异性。即使不是总是可以控制所有事物（尤其是几个人使用相同的孵化器），也有必要最大程度地减少这些温度波动。
如何最大程度地减少温度变化并减少温度恢复时间
通过预热介质
一些研究人员习惯于在37°C的水浴中预热整瓶培养基，以使其在使用前将其提高到该温度。也可以将仅用于培养基预热而不用于细胞培养的培养基中的培养基预热，在这种培养基中，培养基可以在不干扰另一个孵化器中细胞培养物的情况下达到最佳温度。但据我们所知，这通常不是负担得起的费用。
在孵化器内部
尽可能少地打开孵化器门，并尽快关闭。避免冷点，这会在孵化器中产生温度差异。在烧瓶之间留出空间，以使空气循环。孵化器内部的架子可以穿孔。这样可以更好地分布热量，因为它允许空气通过孔。但是，孔的存在可能导致细胞生长的差异，因为孔的区域与元区域之间存在温度差。由于这些原因，如果您的实验需要高度均匀的细胞培养生长，则可以将培养瓶放在具有较小接触表面的金属支撑上，这在常规细胞培养中通常不需要。
最小化细胞处理时间
为了最大程度地减少细胞处理过程的时间，您需要
- ▶在开始工作之前组织所有必要的材料和工具。
- ▶快速，平稳地工作，提前审查实验方法，以使您的操作变得重复和自动化。
- ▶最大程度地减少液体与环境空气的接触。
- ▶在您工作的细胞培养实验室中保持恒定的温度。
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